多种抗原对树突状细胞促成熟作用的研究田发青1季德兰2李举亨1唐玫琴1李惠卿3黄映彩3成小慧1（1深圳市龙岗区人民医院血液内科广东深圳518172）（2深圳市龙岗区人民医院中央悦城社康广东深圳518172）（3深圳市龙岗区人民医院血细胞实验室广东深圳518172）【摘要】目的：研究多种抗原促进树突状细胞（dendriticcells,DCs）成熟作用。方法：外周血单核细胞培养为DC,分别负载卡介苗、肺炎球菌疫苗、麻疹疫苗、K562及RPMI8266冻溶抗原后与T淋巴细胞共培养，以单独加入TNF-a为对照组，再加入相同体积培养基作为空白对照，观察DC形态，流式细胞仪分析DC表型，CCK8法测定混合淋巴细胞反应（MLR）。结果：各组均培养出具有典型形态的DC,其中疫苗各组细胞CD83表达较肿瘤细胞各组明显升高，MLR作用强，而肿瘤组抗原乂较对照组和空白对照组为高，同时各实验组CDla表达较对照组和空白对照组明显降低，P<0.05,但各实验组CDla表达未见明显差异，P>0.05o结论：卡介苗、肺炎球菌疫苗及麻疹疫苗等微生物抗原促进DC成熟能力较K562及RPMI8266等肿瘤抗原能力强。【关键词】抗原；树突状细胞；CD83；混合淋巴细胞反应【中图分类号】R331.1+44【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）08-0385-02MultiplekindsofantigeninducedendriticcellstomaturationITianFaqing,2JiDelan1LIJuheng,ITangMeiqin,3LIHuiqing,3HuangYingcai,lChengXiaohuiIDepartmentofHematology,LonggangDistrictPeople’sHospitalofShenzhen;2BloodCellLaboratory,LonggangDistrictPeople’sHospitalofShenzhen,Guangdong,518172,China【Abstract]ObjectiveToinvestigatethecapabilityofmultiplekindsofantigens(Ags)topromotedendriticcells(DCs)mature.MethodsDCswereinducedfromperipheralbloodmononuclearcellsloadeddifferentAgssuchasBCG,pneumococcalvaccine，measlesvaccine，K562andRPMI8266-freeze-thawAgs,thentobeco-culturedwithTlymphocytes.TNF-aonlywasaddedascontrolgroup,andTNF-aandthesamevolumeofmediumasAgwereaddedasablankcontrol.DCmorphologywasobservedbyinvertedmicroscope,DCphenotypewasanalyzedbyflowcytometry,andmixedlymphocytereaction(MLR)wasdeterminedbyCCK8kits.ResultsCellsineachgroupwereinducedtohavethetypicalmorphologyofDC,whichCD83expressionwassignificantlyhigherinvaccinegroupsthanintumorcellgroups,andwashigherintumorcellgroupsthanincontrolgroupandblankcontrolgroup,whileCDlaexpressionwassign讦icantlylowerineachexperimentalgroupthanincontrolgroupandblankcontrolgroup,P<0.05,butCDlaexpressionineachexperimentalgrouphadstillnosignificantdifferenee,P>O.O5.ConclusionMicrobialAgssuchasBCG,pneumococcalvaccineandmeaslesmaybetterpromoteDCmaturationthantumorcellantigenssuchasK562andRPMI8266・[Keywords]Antigen;Dendriticcell;CD83;Mixedlymphocytereaction树突状细胞(dendriticcells,DCs)是目前已知的功能最强大的抗原递呈细胞⑴，DC在人体内所占数量极微，约为外周血单个核细胞总数的0.5〜1.0%。0前以GM-CSFJL-4处理末梢血中的单核细胞或CD34细胞，可诱导培养出大量DC。本课题观察各种不同抗原刺激对DC功能的影响。1•材料和方法1.1主要试剂卡介苗(BCGV)、肺炎球菌疫苗、麻疹疫苗为友情惠赠,rhGM・CSF、rhlL-4.rhTNF-α,抗人CDla-PE>CD牛FITC、CDllc・PE、CD80・FITC、CD83・FITC、CD86・PE、HLA-DR-FITC单抗为Burlingame公司产品.CCK8试剂盒为Dojindo,Kumamoto,Japan产品，K562细胞和骨髓瘤RPMI8266由中山大学血液病研究所惠赠。1.2单个核细胞的分离所采集标本得到健康志愿者本人自愿同意并签署同意书，实验通过医院伦理委员会批准。采集外周血50ml(40u/ml肝素抗凝)加等体积的PBS液稀释，具体步骤参见文献⑵，收集贴壁细胞，作为单核细胞培养DC。非贴壁细胞作为T淋巴细胞。1.3DC培养调整单核细胞浓度为106/ml,具体步骤参考文献[2],根据分组分别加入稀释的卡介苗、肺炎球菌疫苗、麻疹疫苗(疫苗各组)及K562细胞、RPMI8266细胞冻溶...
