著.同步检测两种输血传播病原体的蛋白微阵列的研究黄敏张敏丽2,蒲晓允3(1.第三军医大学新桥医院检验科，重庆400037；2・军事医学科学院，北京100871)摘要：目的建立一科基于多元蛋白振阵列的免疫检测方法，用于掃查人血清中艾港炳#、丙型肝炎病至.方法将HIV/HCV抗原噴印到活化的玻片表面，抗原与活化基团共价结合后与血渝中的转异性抗体反应，用激光芯片扫措系统对參白微阵列进行扫越成像.所获得的图像用软件进行分析，并自动判定并生成待测样本的定性结果.结黒妥白摄阵列法检测HIV、HCV两种定值血清检测限分别为：12ng/mk5ng/mL运用该系统检测HIV、HCV两种抗体參比品，检测項目的符合隼分别为87・5%、93・75%・结论多元妥白後阵列法特异性潢，灵敏度、准确度、精密度较高，具有直用和推广价值。关■词：參白微阵列♦同步检测$艾滋病丙型肝炎病累:R446.ll文献标识码：A文章第号：1671-8348(2007)10-914-02Studyofproteinmicroarrayforsimultaneousdetectionoftwopathogeninblood-transfusionHUANGMin,ZHANGMin-li,PUXiao-yun{DepartmentofLaboratoryMedicinetXinqiaoHospital>ThirdMilitaryMedicalUniversity^Chongqing400037^China)Abstract:ObjectiveToestablishaimmunoassaymethodthatisbasedonmultiplexproteinmicroarrayforthescreeningofHIV,HCVinhumanserum.MethodsFirstlyHIV,HCVantigenwereprintedontothesurfaceofactivatedslides.Thenthecova-lentbondingofantigenandactivateinggroup,proteinmicroarrayweremadeup.Aftertheseantigensfixedonthesurfaceofslidesresponsedandcombinedwithspecialantibodysinserum»proteinmicroarraywerescanedandimagedbyahigh-resolutionlaserconfocalmicrarrayscanninganalysissystem・Theimageswereanalyzedandassessedbythesoftware>andthequalitativeresultsofthesesamplesweregot.ResultsDetectingHIV,HCVantibodysbyproteinmicroarrayandcomparingwithELISA»theconinci-dencesofallitemswasrespectively87・5%»93.75%・ConclusionMultiplexproteinmicroarrayhashighspecificity,sensitivityandaccuracysothatdeservesextendedapplication・Keywordsxproteinmicroarray»simultaneousdetection,humanimmunodeficiencyvirus(HIV)jhepatitisCvirus(HCV)加强血源及血液制品的筛查和监控是有效防止感染血液传播性疾病的重要手段。按《输血法》的要求需对艾滋病病毒（HIV）、丙型肝炎病毒（HCV）进行筛査。目前常采用ELISA、PCR等方法，但存在不能现场检测、操作复杂、价格昂贵等不足。本研究以玻片为固相基质，制成HIV、HCV蛋白微阵列芯片，建立一种新型的高效、快速、方便的血液传播性疾病筛选方法。1材料与方法1.1主要试剂载玻片（ERIEScientific公司），HIV、HCV融合抗原（军事医学科学院基础医学研究所分子病毒研究室与深圳益生堂生物企业有限公司共同研制）.Cy3荧光标记的兔抗人IgG抗体购于Sigma公司.小牛血清（杭州四季青公司）。HIV、HCV抗体的ELISA检测试剂盒均购于华美生物工程公司，批号分别为20000602、20000402。其他试剂均为市儕分析纯.1.2方法1.2.1点样载玻片分成10个区，各区之间用薄胶带隔开以避免污染，将HIV、HCV两种融合抗原用0.Olmol/LPBS（PH7.0）配成50mg/L浓度，用点样仪将其点样于醛基化玻片上,37-Cfi浴2h后晾干.洗涤与封闭：用含10%小牛血清的PBS（0・01mol/L确酸盐，pH7.2,0.9%NaCI）37'C封闭2h,洗涤，晾干放于4C冰箱过夜后备用.1.2.2检测操作取出制备好的芯片，加1*10倍稀释血清10Ml,37C水浴30min,PBS-T（0.01mol/L磷酸盐，pH7.2,0.9%NaCl,0・05%Tween20）洗涤5次。每孔加入Cy3荧光标记的兔抗人IgG,37*C婷育30min,PBS>T洗涤5次。1.2.3图像扫描经加样检测操作后的玻片用Scanar-ray3000型激光共聚扫描仪扫描成像，扫描仪的激光强度设定为60%〜80%,光电倍增管强度设定为80%。1.2.4图像处理及荧光信号数据分析扫描后的图像用图像分析软件进行分析，获得含有每个抗原荧光强度值的文件，再用编写的数据分析软件自动处理文件上的各点荧光强度数值，得岀每孔内各种抗体检测的荧光强度的数值与阴性孔内相应荧光...