HLA-B27基因在云南汉族白血病中的研宄梁艳丽1何勤2王旭2(1四川遂宁市中心医院629000;2四川昆明医学院第二附属医院血液科650101)【中图分类号】R733.7【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)35-0010-03【摘要】目的探讨HLA-B27基因与云南汉族白血病患者的关联性。方法运用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)扩增方法检测26例云南昆明汉族白血病的患者HLA-B27基因的分布，对照组为62例来自云南昆明汉族无血缘关系的健康者。结果26例白血病患者中，HLA-B27基因阳性为1例，占3.8%;在62例对照组中，有3例为阳性，占4.8%。两者无明显差异。结论研究没有发现HLA-B27基因与云南汉族白血病具有相关性，也没有发现HLA-B27基因在木组白血病患者与正常健康人中的分布有差异性，这可能与白血病的复杂的发病机制，分类较多及人群地理分布及样木量有关。【关键词】HLA-B27基因云南汉族白血病人类白细胞抗原人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen,HLA)复合体是位于第6号染色体短臂(6p21.31)的一组紧密连锁的基因群，DNA长度约3600kb。HLA-B27抗原为HLA-I类基因B座位上的抗原，是一组紧密相关的组织相容性抗原。1973年Brewerton报道了HLA-B27与强直性脊柱炎(ankylosingspondylitis,AS)病因及发病机制密切相关［1］。近几年来，研究发现HLA与白血病亦有相关性。白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病,到目前为止，该病的确切发病机制尚不清楚。多数学者认为，白血病是由物理、化学、生物及遗传等多方面因素共同作用的结果。据文献报道［2］,具有高度多态性并与抗原呈递和识别有关的HLA分子，可能是导致白血病的重要遗传因素之一。HLA-B27基因与白血病是否有关联性，关联性如何，我们将通过建立序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法对HLA-B27基因与云南汉族白血病患者的关联性进行初步探讨。1材料和方法1.材料1.1病例组品明医学院第二附属医院血液科临床确诊为白血病的患者,共26例。其中男性12例，女性14例，年龄5〜70岁，平均年龄42岁。急性髓细胞白血病(AML)11例，急性淋巴细胞白血病(ALL)8例，慢性髓细胞性白血病(CML)3例，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)3例，急性双表型白血病1例。1.2对照组云南昆明汉族健康群体62例，其中男性31例，女性31例，年龄14〜75岁，平均年龄44岁。1.3标本要求所有患者均进行了血常规、外周血涂片分类、骨髓细胞学、组织化学染色、骨髓病理学、白血病细胞免疫分型及染色体核型等检查，部分患者进行了融合基因检测。1.4主要试剂PCR反应试剂10×PCRBuffer,2×GCBufferI,rTaq酶，LaTaq酶均购自中国大连TakaraBiotech公司2.方法2.1样本DNA的提取血样处理：抽取静脉血5-6ml，置于无菌真空管中，EDTA抗凝，用传统酚/氯仿抽提法2.2DNA浓度测定取10ulddH20中，使用紫外分光光度仪检测每份DNA溶液的OD280值，计算OD260/OD280，比值在1.7-1.9范围内为正常(浓度约为0.2-2.4ug/ul)。2.3PCR反应根据序列特异性引物扩增法(PCR-SSP)设计HLA-B27基因的引物序列[13],然后进行HLA-B27基因片段的扩增。具体如下：(2)扩增HLA-B27基因片段①引物序列：上游引物为：5’GCTACGTGGACGACACGCT3’,下游引物1为：5’CTCGGTCAGTCTGTGCCTT3’，下游引物2为：5’TCTCGGTAAGTCTGTGCCTT3’o②PCR反应体系：10×PCRBuffer(Mg2+Plus)2.5ul,dNTPMixture(各2.5mM)2.0ul,上下游引物(25ummol/L)0.5ul,模板DNA(25ng/ul)0.5ul，TaKaRarTaq酶(5U/ul)0.125ul，ddH2018.8ul,共25uL③PCR扩增条件：94°C预变性2min,95°C30sec、65°C50sec、72°C40sec,扩增10循环;95°C30sec、62°C50sec、72°C40sec,扩增20循环;72°C延伸lOmin,12°ClOmin。(3)电泳，电泳结束后，放置凝胶成像系统紫外灯下观察结果并拍摄苏照片。2结果1.HLA-B27基因在云南白血病患者中的电泳结果1.2HLA-B27基因片段的扩增结果:与预计大小相符，扩增片段为149bp，如图2-2，图2-3。注：图2-2为B27下游引物为1的扩增产物图2-3为B27下游引物为2的扩增产物2结果26例白血病患者中，HLA-B27基因阳性为1例，占3.8%;在62例对照组中，有3例为阳性，占4.8%。采用四格表X2检验，得出X2值为0.042,P=1.00,P...