锦鲫Clock基因表达量分析中的内参基因稳定性比较摘要为研究锦鲫Clock基因表达量分析中的内参基因稳定性，采用qRTPCR技术进行实时荧光定量分析，并用GeNorm和NonnFinder软件对5个内参基因(RPL13,GAPDH,18SrRNA,Pactin和RPS29)进行稳定性评估，筛选出不同组织中最适合的内参基因，以准确定量Clock基因的相对表达水平•实验结果表明，5个内参基因中，18SrRNA在锦鲫的肌肉、心脏、肝脏中表达最稳定，Pactin在肠中表达最稳定，RPL13在肾中表达最稳定；根据筛选的内参基因定量Clock基因的相对表达水平发现，Clock基因在锦鲫肌肉中相对表达量最高，其次依次是肝脏、肾、肠,心脏中最低•本研究准确定量Clock基因，为锦鲫生物钟节律机制的下一步研究奠定了理论基础.关键词内参基因；qRTPCR；锦鲫；GeNorm程序；NonnFinder程序中图分类号S9174文献标识码A文章编号10002537(2016)06003706StabilityComparisonofReferenceGenesonExpressionAnalysisofClockGeneinCarassiusAuratusPENGZhitaol,2,JIANGGuomin3,Z0ULi3,LIJinlong3,CHENGXiaofei3,FANGLijuan4,WANGXiaoqingl*,LIULil,3*(1.CollegeofAnimalScieneeandTechnology,HunanAgricultureUniversity,Changsha410128,China；2.AquaticProductsSeedStockStationinHunanProvince,---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---Changsha410153,China；3.FisheriesResearchInstituteofHunanProvince,Changsha410153,China；4.CollegeofBasicMedicine,CentralSouthUniversity,Changsha410012,China)AbstractTheaimofthisstudyistocomparethestabilitydifferenceofreferencegenesfromtheexpressionanalysisofClockgeneinCarassiusauratus・ThemRNAexpressionoffivecandidatereferencegenessuchasRPL13,GAPDI118SrRNA,0actin,andRPS29weredetectedbyusingtheqRTPCRmethod,andGeNormandNormFindersoftwarepackages.TheoptimalreferencegenesselectedbyanalyzingandevaluatingtheirmRNAexpressionstabi1itywereappliedtoaccuratelyquantifytherelativeexpressionleveloftheClockgeneindifferenttissuesofCarassiusauratus.Ourresultsshowthatoneofthemoststablereferencegeneswas18SrRNAfromthreetissues,includingmuscle,heart,andliver,amongthefivereferencegenes,whereasthatfoundinintestineswasBactinandinkidneywasRPL13・Whentheseoptimalreferencegeneswereselectedinfivetissues,wefoundthattherelativeexpressionleveloftheClockgenewasthehighestinthemuscletissue,followedbyliver,kidney,andintestines,andthelowestwasinheart.Insummary,thisstudyhasaccuratelyquantifiedtherelativeexpressionlevelsoftheClockgeneintissues,whichshouldserveasthetheoreticalbasisforthefuture---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---investigationoftheClockgenerhythmsystem・Keywordsrefereneegene；qRTPCR；Carassiusauratus；GeNormsoftware；NormFindersoftware实时荧光定量PCR（qRTPCR）技术因具有灵敏度高、重复性好以及定量准确等优点，被广泛用于生物科学的各个研究领域•但这一技术能否准确定量取决于很多因素，如实验材料质量、RM质量、cDNA第一链合成效率及内参基因的选择[1]・其中，选择合适的内参基因对试验数据进行校止和标准化，获得更接近于冃的基因特异性表达的真实值是基因表达定量实验中的关键[2]•内参基因，也叫看家（持家）基因，是用来做内部参照的基因，因具有在各个组织和细胞中表达相对恒定的特点而作为目的基因的相对表达水平时的参照基因•一个理想的内参基因要在不同组织、不同发育阶段以及不同处理因素下都能体现恒定的表达水平•然而，现实中稳定表达的基因几乎不存在，因此选择合适的内参基因用于基因表达差异分析非常关键.Clock基因是一种生物钟基因，在动物的各个组织中广泛表达[3],在维持正常的近日节律中起着至关重要的作用•本研究选择RPL13,GAPDH,18SrRNA,Pactin和RPS29共5个候选内参基因，釆用SYBRgreenIqRTPCR方法，利用GeNorm程...