O烟叶表面的微生物发酵作用，对烟叶的陈化起陈化烟叶表面可培养寡营养菌多样性分析摘要：通过低浓度营养培养基分离4种不同陈化烟叶表面的微生物,经过连续2〜4周的培养，共获得88株不同的菌株，通过扩增和测序进行初步的分子鉴定后，进行BUST比对分析，挑选每个菌株最大一致性的同源菌株MiS■■序列一起进行系统聚类分析。结果表明，陈化烟叶中微生物存在着广泛的多样性，每种烟草中都拥有自己独特的微生物菌群，存在大量的兼性寡营养菌，专性寡营养菌较少，而R烟叶的品种和等级直接影响到微生物的种群和数量。关键词：陈化烟叶；寡营养菌；细菌多样性；■S1序列；聚类分析中图分类号：TS4H-1文献标识码：1文章编号：t4W-tll4(3»»)烟叶在制成成烟Z前需要经过漫长的陈化期，烟叶陈化是卷烟工业的一种初加工方法。当年收获的新烟叶，其品质都存在不同程度的缺陷，不宜直接用于制造卷烟，必须进行陈化处理在陈化发酵过程中，烟叶主要化学成分发生变化，青、杂气和刺激性大大减轻，香气显霧，气味醇着重要的作用。新烟叶在经过漫长的陈化阶段后，烟叶的品质进一步得到改善，有害物质的含量也随着降低。这个时期一般需要年，如何缩短这个时期一直是科研工作者的研究热点II,AHo烟叶表面含有丰富的微生物已有大量研究报道，如爲“等IM通过非纯培养的方法对多种不同陈化时期的烟叶表面微生物进行了研究，采用IbS■■Ka-BCCC技术进行多样性分析发现，早期陈化阶段各种烟叶拥有相似的---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---和，色泽均匀并加深甚至饮用水中oMibJ指出了寡营养菌营养偏好的原因，等1131优势微生物种群结构，主耍有■种细菌，其中J种为未培养微生物等II通过ttLTP技术构建叫匕丄克隆文库比较陈化与非陈化烟叶细菌多样性发现，在陈化的烟叶中存在大量的未培养微生物。韩锦峰筹IM通过对未发酵、口然陈化及人工发酵期间的烤烟叶面微生物进行分离、鉴定，并对不同发酵时期微生物进行•动态研究，结果表明，未发酵烤烟叶面微生物数量最多，但是随着自然陈化及人工发酵的进行，叶血微生物数量均逐渐减少，且以芽抱杆菌属(Ill.)和梭状芽抱杆菌属(dwim)为优势种群。朱大恒等HI研究也发现烤烟中以芽抱杆菌和梭状芽抱杆菌为优势种群。而且大量研究表明烤烟叶面微生物中，细菌占绝对优势，放线菌和霉菌较少，细菌中以芽抱杆菌属为优势菌群，霉菌中以曲霉为优势菌群。优良品种烤烟叶面微生物的数量较大，种类也较多。因此研究不同烟草表面的微牛物多样性具有重要意义。寡营养菌概念提出时没有特指哪一类的微生物II。直到IWI年，等"■才提出了寡营养菌是特指那些第一次培养时可以在含碳浓度为I培养基中生长的细菌，并把它分为两类，一类为在寡营养和富营养条件下均〜能生长的细菌，称为兼性寡营养菌；另一类为只能在寡营养培养基中生长的细菌，称为专性寡营养菌。科研工作者现在已经从多种生境中分离到了寡营养菌，它广泛存在于海洋、湖泊、河流、土壤则研究了它对营养物质利用的动力学机制，发现寡营养菌的米氏常数较低，对营养物质的亲和力大于富营养菌，因而在寡营养条件下能够获得竞争优势。国内关于寡营养菌的研究起步晚，报道得也少。潘惠霞等1141通过分离新疆沙漠中寡营养菌并对其在防风固沙方血进行研究发现，一些寡---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---营养菌产生的胞外多糖能够对沙粒产生粘连作用。和振花等Im对极地海水中寡营养菌多样性进行了研究。目前尚没有研究烟叶中寡营养菌的报道，根据以往关于陈化烟叶表面微生物分离和多样性的报道推测，在漫长的陈化过程中，尤英是对于烟草品质提升有关键作用的中后期，可利用的简单营养物质几乎消耗殆尽，大部分菌株死亡，只有寡营养菌株才有可能生长。随着陈化时间的延长，烟草的等级就越高，品质就越好，最后起作用的主要是寡营养菌。因此，研究陈化烟叶中寡营养菌的多样性，对于解释传统的陈化作用如何利用微生物来改善烟叶品质有着十分重要的意义。此次试验尝试利用寡营养培养基对陈化烟叶表血的可培养寡营养菌进行分离和多样性研究。|材料与方法L...