管碟法测定万州红桔精油抑菌效果研究向春艳胡悦摘要：采用超声波提取法提取万州红桔精油，通过管碟法测定红桔精油对6种试验菌的抑菌效果，用二倍稀释法测得其最低抑菌浓度。结果表明：红桔精油对6种试验菌均有不同程度的抑制作用，其中对单核细胞增生李斯特氏菌的抑菌作用最强，对大肠埃希氏菌和短小芽孢杆菌的作用次之。阪崎肠杆菌、白色念珠菌和大肠埃希氏菌的最低抑菌浓度为12μL·mL-1;短小芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为24μL·mL-1。关键词：万州红桔;精油;抑菌效果Abstract：Wanzhoutangerineessentialoilwasextractionbyultrasonicextraction，determinationofbacteriostaticeffectofessentialoiloftangerineon6kindsofexperimentalbacteriabycylinder-platemethod，determinationoftheminimuminhibitoryconcentrationbydoubledilutionmethod.Theresultsshowthat：theessentialoiloftangerineinhibitedthegrowthofsixkindsofexperimentalbacteriainvaryingdegrees，amongthem，Listeriamonocytogeneshasthestrongestantibacterialeffect，theeffectonEscherichiacoliandBacilluspumiluswasthesecond.TheminimuminhibitoryconcentrationforEscherichiacoli，CandidaalbicansandEscherichiacoliwas12μL·mL-1，andtheminimuminhibitoryconcentrationofBacilluspumilus，ListeriamonocytogenesandStaphylococcusaureuswas24μL·mL-1.Keywords：Wanzhoutangerine;Essentialoil;Antibacterialeffect中圖分类号：S666.2柑橘（CitrusreticulateBlanco）是芸香科植物。万州红桔古称丹桔，是柑橘属的一个重要品种，是中国国家地理标志产品。红桔皮中含有挥发油，可制备精油，有研究表明，柑橘精油具有很好的抑菌效果[1-2]，广泛应用于食品、化妆品、烟酒制品、医药制品等行业[2]。在当代食品行业，为了保证食品不被微生物污染，添加防腐剂、保鲜剂等仍是最常用的手段，但化学添加剂的蓄积会对人体造成健康风险，而取材天然的橘皮精油，不仅具有良好的抗菌作用，安全性也非常高，可用于开发新型抑菌剂，未来市场前景非常好。本实验以万州红桔皮为原料提取精油，通过管碟法测量万州红桔精油对大肠埃希氏菌等6种试验菌的抑菌作用，确定最低抑菌浓度，为今后开发万州红桔新产品，提高红桔产业的综合应用提供一定的参考。1材料与方法1.1材料与试剂大肠埃希氏菌（ATCC25922）、阪崎肠杆菌（CMCC45401）、短小芽孢杆菌（CMCC63202）、金黄色葡萄球菌（CMCC26003）、单核细胞增生李斯特氏菌（ATCC19115）以及白色念珠菌（ATCC10231）均来源于广东省微生物菌种保藏中心。万州红桔购自重庆市万州区沪万农贸市场。营养琼脂（广东环凯微生物科技有限公司）;改良马丁琼脂（青岛海博生物技术有限公司）;石油醚（30～60℃，分析纯，成都市科隆化学品有限公司）;氯化钠（分析纯，重庆川东集团有限公司）;95%乙醇（分析纯，重庆川东集团有限公司）。1.2仪器与设备电子天平（AB204-S，梅特勒-托利多国际贸易上海有限公司）;电热恒温水浴锅（SSY-H，上海三申医疗器械有限公司）;立式压力蒸汽灭菌锅（LDZH-100KBS，上海申安医疗器械公司）;生物安全柜（BHC-1300ⅡA2，苏州安泰空气技术有限公司）;电热恒温培养箱（DHP-9272型，上海益恒实验仪器有限公司）;霉菌培养箱（MJ-150-I，上海齐欣科学仪器有限公司）。1.3方法1.3.1红桔精油的提取称取新鲜破碎的万州红桔果皮15.0g，加入60mL石油醚，浸泡30min，80W超声功率下超声60min，过滤，滤液置蒸发皿中于60℃恒温水浴锅中挥发干溶剂，得到红桔精油。1.3.2红桔精油抑菌试验①培养基及试剂的制备。分别配制营养琼脂、改良马丁琼脂、生理盐水备用。②菌悬液的制备。细菌接种于营养琼脂斜面，于36℃下培养，真菌接种于改良马丁琼脂斜面，于28℃下培养，24h后取出，用无菌生理盐水洗下菌苔，经平板计数后得到菌含量约为4.0×107CFU·mL-1的6种菌悬液，备用。③管碟法测定抑菌圈。吸取6种待测菌悬液各0.1mL，均匀涂布于相应的琼脂平板上，静置5min，等待菌液吸收。取无菌镊子将内径为6mm的4个灭菌小钢管置于平板上，2个加15...