应用女性拭子预处理痰培养标本的方法学临床研究1.甘肃天水市407医院（甘肃天水741000）2.甘肃天水市麦积区中医医院（甘肃天水741000）【摘要】目的在痰标木细菌培养中，对木科自主创新的女性拭子研磨涂布痰标木预处理方法进行评价。方法收集我院肺部感染患者痰培养合格标木206份，釆用直接接种培养法、二硫苏糖醇均质化法和女性拭子研磨涂布三种方法接种平板培养，观察培养结果，统计分离出致病菌的阳性分离率。通过采用卡方检验,比较三种方法的阳性率差异。结果经预处理后接种培养法阳性率均比直接培养法高，差异有统计学意义（P<0.05）o二硫苏糖醇均质化法和女性拭子研磨涂布两种方法间比较阳性率无统计学意义（P>0.05）o结论预处理后的培养结果阳性率比直接接种培养阳性率高，女性拭子研磨涂布与传统的痰标木预处理方法（二硫苏糖醇均质化）相比无显著性差异，阳性分离率较高，而且女性拭子研磨涂布预处理痰标木方法操作简单，材料易得，不需要特殊试剂，成木低廉，省时省力，不容易被污染，处理后的标木几乎没有杂菌干扰，致病菌阳性检出率高，所以方法可行，便于临床实际操作,适合在细菌室预处理痰标木时推广应用。【关键词】痰培养；预处理；【中图分类号】R446.5【文献标识码】A下呼吸道感染通常用痰标木进行病原学检验，但由于痰液标木具有明显的非均质性，细菌等成分的分布很不均匀［1］，而H在咳痰时极易受到上呼吸道分泌物中正常菌群的污染，从而导致难以准确识别致病菌，影响培养结果阳性检出率,所以多年来，木科室针对痰培养阳性率低的问题，作了多方面的探索，积累了一些经验和体会，目前，结合实验室条件，我科室初步尝试采用生理盐水洗涤与女性拭子研磨相结合的方法对痰液进行前处理后，再滚动涂布接种培养，使细菌培养阳性率有了明显提高，取得了满意的效果，现报告如下。1材料与方法1.1标本来源收集2014年2月-2015年6月天水407医院肺部感染住院患者合格痰液标本206份做为研究标本，标本来源性别年龄不限。1.2标本采集取晨痰或纤支镜吸痰。晨痰留取前,患者先用冷水漱口清洗咽喉，然后气管深部咳出痰液，置于无菌痰盒中送检。纤支镜吸痰由纤支镜实验室按操作规程采集后，送微生物室检验。1.3仪器试剂血平板、麦康凯和巧克力平板由赛默飞生物工程有限公司生产，细菌鉴定仪及配套细菌鉴定板‘CO2孵育箱、无菌滴管等由湖南长沙天地人公司生产，革兰染液珠海由BASO公司提供，女性拭子由扬州市创新医疗器械厂提供，无菌生理盐水由石家庄四药有限公司提供，其它实验器材自配后经高压灭菌备用。1.4试验方法以接种环直接接种痰标本的做为对照组,用二硫苏糖醇均质化法、女性拭子研磨涂布两种预处理后的为试验组，将同一个患者的痰标本分别用三种方法进行接种培养和鉴定。记录鉴定结果,采用卡方检验，比较三种方法的阳性率差异，从而评价三种方法对痰培养阳性率的影响。1.4.1痰涂片镜检取脓性或血性痰液一接种环在洁净玻片上，压片制成均匀的薄膜，干燥后固定，进行革兰染色，在显微镜下观察，凡白细胞＞25个/LP且鳞状上皮<10个/LP或鳞状上皮为10-25个/LP,或白细胞：鳞状上皮&gt；2.5:1的标本为合格标本，其余为不合格标本，不进行下一步处理⑵。1.4.2接种环直接接种(做为对照组)将未经任何预处理的合格痰标本取脓性或血性部分一接种环直接分区划线接种于血平板、麦康凯和巧克力平板上,置(35&plusmn;2)°CCO2温箱培养。1.4.3二硫苏糖醇均质化将痰标本加入含有15~20ml灭菌生理盐水的试管中，剧烈振荡5~10s,然后用接种环将沉淀于管底的脓痰小片取出，再放入另一试管内，以同样方法反复3次⑶，然后于痰标本中加入等量的二硫苏糖醇消化液，放置37°C90min,期间适当摇动，即能使痰液均质化，再将均质化的痰液接种于血平板、麦康凯平板和巧克力平板上，置(35&plusmn;2)°CCO2温箱培养。1.4.4女性拭子研磨涂布在盛有痰标本的无菌痰盒中，直接加入无菌生理盐水15~20ml,用无菌滴管反复多次吹打痰液，弃去上清液，如此洗涤至少3次。然后用女性拭子搅拌研磨已洗过三遍的痰标本，使块痰变成碎痰，再用拭子挑取碎痰均匀滚动涂布于血平板、麦康凯和巧克力平板的第一区，反复挑取、涂布三次...