VEGF反义核酸对HL-60细胞作用和机制研究

中国实脸血液学杂志JournalofExperimentalHematology2004;12(5):640-643(ID):1009-2137(2004)05-0640-04VEGF反义核酸对HL・60细胞作用和机制研究费嘉,张沮暨南大学医学院血液病研究所,广州510632摘要本研究探讨血管内皮生长因子(VEGF)反叉核酸对HL-60细胞生长的童效和时效关系,并研究其作用机制以揭示VEGF雇因掰的功能)用含20个脱氧核箱核酸的反义核酸A7(用计算机模拟设计和实验筛选出的最优序列)全疏代修饰,以脂质体介导进入细胞,培养72小时后用MTT法计算细胞生长抑制率;采用台盼蓝拒染法每24小时观条细胞存活情况并计数;用Giemsa染色观测细胞形态学改变;用流式细胞仪检测细胞凋亡百分數;用VEGFELISA试剂盒测定蛋白的水平。结果显示,反义药物对HL-60细胞生长有明显抑制作用,呈刑董依赖关系,并且下调VEGF爰白的表达;反义药物对HL-60细胞的凋亡无明显影响。结论:VEGF反义药物抑制HL-60细胞生长的机制是抑制细胞增殖,而不是促进细胞凋亡,内源性VEGF妥白具有促进HL-60细胞增殖的功能,关键词血管内皮生长因子;HL・60细胞;反义寡核昔酸;细胞增殖R733.7;R329.28文献标识码AEffectandMechanismofVEGFAntisensePhosphorothioateDeoxynucleotidesonHL-60LeukemicCellsFEI激a,ZHANGHuanInstituteofHematologyfMedicalCollegeof激nanUniversity9Guangzhou510632,ChinaAbstractToexploredose-effectortime-effectofvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotides(ASPS-ODN)ongrowthofHL-60cells,andtostudytheeffectmechanismsoastofindnewroleofVEGF,A7twhichwa^themosteffectiveoneofASPS-ODNselectedwithcomputer-aideddesignandexperi・mentalassay,contains20-DNAmodifiedwithphosphorothioateandwastranferedintocellsmediatedwithlipofectin・Afterculturefor72hours,inhibitiverateofcellgrowthwasdetectedwithMTTmethods♦viablecellswerecountedwithtrypanblueexclusioneach24hour,cellconfigurationandapoptosiswereobservedwithGeimsastainingandflowcytometryrespectively>levelofVEGFproteinwasdetectedwithVEGFELISAkil.Theresultsshowed(hatA7isable(oinhibitcellgrowthofHL-60indose-dependingmannerofASPS»()DN・todown-regulateVEGFproteinexpressionsignificantly•andnottoinduceapoptosisofHL-60cells•Itisconcludedthat(hereispossibilitythattheinhibitioneffectofVEGFASPS-ODNonHL-60cellgrowthistorestraincellproliferationwithoutinducingapoptosisofUL-60cell.whichwouldinterpretthatendogenousVEGFproteinshaveacapacityofpromotingproliferationofHL-60cell・KeywordsVEGF;HL-60cell;antisensephosphorothioateoligodeoxynudeotides;proliferationJExpHematol2004;12(5):640-643•640••论著•血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是与血管新生相关的特异性生长因子,VEGF在实体瘤的发生、发展及转移过程中起重要作用。最新研究发现,恶性血液病细胞亦高表达VEGF蛋白,并不同程度表达VEGF受体®刀,VEGF在恶性血液病中的作用不其明确,有人认为可能是通过自分泌作用机制促进癌细胞存活和生长等”⑷,但有待进一步研究和证明。在以前的研究中,我们已证实VEGF反义核酸是通过抑制VEGF蛋白表达干扰其自分泌途经,抑制HL-60、K562细胞的生长,并筛选出最优反义序列A7”⑹,但对VEGF反义核酸抑制HL-60细胞的生长的机制不清楚,因为细胞增殖或凋亡抑制均可导致细胞快速生长⑺—阐明其作用机制不仅有理论上的价值,而且对开展有针对性的治疗具有指导意义。本研究将进一步探讨VEGF反义核酸(A7)的作用机制是抑制细胞增殖还是促进细胞凋亡,同时对VEGF反义核酸药物的量效和时效关系进行分析。基金项目:本课题为广东省自然科学基金取点项目(021195)・广州市科技重点基金项目(2001-2-037-01)通讯作者:张滬,所长、研究员、博士生导师•电话:020-85222073;E-mail:tzyuan@jnu・edu2003-10-20收稿;2004-05-20接受VEGF反义枚酸对HL60细胞作用和机理研究•641•材料与方法反义核酸(全...

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