术中冷冻切片的规范化操作及常见问题分析陈巧君黄燕（通讯作者）（浙江大学医学院附属第二医院浙江杭州310009）【摘要】目的：优化冰冻切片技术，提高术中病理诊断的准确率。方法：收集2014〜2015年期间木院病理科冰冻切片2000余例，重新阅片，分析讨论发现的问题及原因。结果：不规范的冰冻切片操作严重影响冰冻切片。结论：规范化操作可以提高病理诊断的科学性、可靠性。【关键词】冰冻切片；规范化操作；病理诊断【】R636【文献标识码】A【】2095-1752（2016）06-0205-02术中冷冻切片是目前病理科最为常用的快速制片方法之一，它是借助低温冷冻将手术切除标木的组织块快速冷冻达到一定硬度进行切片的一种方法［1］。高质量的冷冻切片对于确保术中病理诊断的科学性、可靠性兵有极其重要的作用,从而有效降低术中病理诊断的风险。1.材料与方法1.1取材送检标木要及时、新鲜，不能沾水和放入固定液，特别是脑组织避免用生理盐水纱布伍裹。取材时尽量避开组织坏死出血区，剔除不必要的脂肪组织、毛发及钙化物等。细小组织全取材，大组织的取材大小在1.5cm1.5cm0.2cm,以厚度不超过0.3cm为宜。1.2包埋包埋冻头使用后应用纸巾擦干净后放在冷冻切片机的冷冻台上预冷。根据组织的特性及医牛.要求来确定埋方向，囊壁组织可卷曲成团，皮肤和管腔样组织应立埋。包埋剂应适量，大块组织可直接放置于滴加包埋剂的组织托上，再用冷冻锤压在组织块上，使其上下一起迅速制冷，既缩短冷冻的吋间，又使组织块十分平整，利于切片。小组织（如穿刺、切缘等组织）包埋吋应先滴加少许包埋剂在组织托上，等包埋剂渐渐发白，再将小组织放在组织托上，再用冷冻锤压，避免应切片不完整而导致病理漏诊。1.3切片包埋后组织的冷冻是整个冷冻切片十分关键的步骤之一，冷冻的好坏直接影响到切片的质量。在实践中，我们总结了不同组织的最佳冷冻温度（表1）。冻好的组织块应先进行粗修，暴露组织的最大面后再进行切片，切片吋用力均匀。冷冻切片厚度一般在5mu;m，淋巴结在3〜4mu;m，对于脂肪瘤标本厚度可增加至30mu;m。贴片吋手要有一个向下伸展的动作，防止切片产生皱褶，动作要温柔，避免气泡产生。1.4固定固定是冷冻切片的关键。固定的作用在于使蛋白变性、凝固、沉淀，终止或抑制酶活性，保存组织、细胞原冇的形态结构和抗原性［2］。冷冻切片的固定液有10%福尔马林、纯丙酮、95%乙醇、甲醇等［3］，笔者经过多年实践，认为甲醇固定lmin效果较好，与文献报道基本一致［4-5】。切片后组织应立即固定，避免在空气中停留太久。1.5染色组织细胞内的不同物质经固定后产生不同的折光率，对染料产生不冋的亲和力，经染色后容易区别［6】。新鲜组织固定吋间可适当缩短，一般冷冻切片苏木素染色吋间在1分钟左右，冬天室温较低吋可给苏木素适当加温以缩短染色吋间。水洗后可直接温水蓝化，蓝化应充分，入伊红液10sec后进行梯度洒精脱水，二甲苯透明，封片处理。2.结果如图所示，乳腺组织与肺组织切片质量都比较好，切片结构清晰，完整无褶皱，颜色鲜艳，对比度好，极少出现影响诊断的因素，准确率达99%以上。3.讨论3.1冰晶的形成组织中的水分经冷冻后形成冰晶。切片中冰晶形成的区域无细胞组织结构，呈结晶样或不规则空泡，影响病理诊断。冰晶出现以中枢神经系统送检的组织最为常见，主要因送检的组织小，组织含水量多，对制片质量要求较高，切片太厚或染色不好，刀痕、挤压、烧灼都会影响诊断。对于胶质细胞增生或胶质瘤I级的鉴别极为闲难，也可能将髓鞘病变诊断为胶质细胞肿瘤。冰晶的形成机制主要有二［7】：一是蛋白质和水所形成的胶体状态受到破坏，水分从胶体状态的蛋白质中分离出来形成冰晶；二是人体细胞大约含有30%〜40%水分，水在4°C时体积最小，冷却至零度以下吋，水结成冰，体积增大。冰晶形成的原因：①组织含水量太多，未吸干水分就直接包埋冷冻；②取材太大太厚，导致冷冻吋间过长；③取材吋水洗后的刀具未擦干水分；④操作不熟练，长吋间的冷冻还未切好。3.2组织结构不清细胞形态模糊，边界不清晰，镜下观察发白。此类现象多为固定不佳引起,各种组织都可以出现。主要原因：①贴片后被晾干或吹干后固定；...