基于SRAP—PCR研究百合鳞片DNA提取摘要：采用改良的CTAB法从百合(L订iwnlancifoliumThunb.)鳞片中提取DNA,采用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测所提取的DNA质量，并进行SRAP-PCR分析。结果表明，改良的CTAB法提取的百合DNAA260nm/A280nm为1.69,浓度为0.30Pg/uLo琼脂糖胶电泳检测结果显示提取的DNA为清晰的条带，RNA去除干净，无降解现象。SRAP-PCR扩增产物多态性好，稳定性高，可用于遗传多样性分析。关键词：百合(Liliwn)；鳞片；SRAP；DNA提取中图分类号:Q523文献标识码：A文章编号:0439-8114(2012)21-4896-03DNAExtractionfromSquamaLeavesofLiliwnlan-cifoliumforSRAP-PCRAnalysisLIJia-min,ZHOUXiu-ling(CollegeofChemicalandBiologicalEngineering,YichunUniversity,Yichun336000,Jiangxi,China)Abstract：ModifiedCTABmethodwasappliedtoex-tractDNAfromsquamaleavesofLiliwnlancifoliumThunb..UltravioletspectrophotometryandagarosegelelectTophoresisaswe11asSRAP-PCRwereadoptedtotestthequalityofextractedDNA.TheresultsshowedthatA260nm/A280nmofDNAwas1.69,andconcentra-tionwas0.30ug/uL.Theagarosegelelectrophore-sisshowedthattheDNAhadclearbandwithoutdegra-dationorRNA.TheSRAP-PCRproductwaswithgoodpolymorphismandstability,whichcouldbeusedforgeneticpolymorphismanalysisofLiliwn.Keywords：Liliwn；squamaleaves；SRAP；DNAextraction相关序列扩增多态性(Sequence-relatedamplifiedpolymorphism,SRAP)标记因具有简便高效、快速稳定、共显性和重复性好、便于克隆目标片段等优点而备受青睐，目前已成功地应用于作物遗传多样性分析、遗传图谱的构建、重要性状的标记以及相关基因的克隆等。中药百合来源于百合科植物卷丹(Liliumtigrinum)、百合(Lbrowniivar.viridulum)＞细叶百合(Lpum订um)的干燥肉质鳞叶[1],具有养阴润肺、清心安神的功效，临床可用于阴虚久咳、痰中带血、虚烦惊悸、失眠多梦、精神恍惚等症的治疗。中国是百合的故乡，全世界百合属植物约有94个种，起源于中国的有47个种、18个变种[2],其中36个种、15个变种为中国特有。但目前中国种植的百合多数是从国外引进的，而国内现有的百合资源尚未得到充分的利用，且破坏和流失现象十分严重。对百合的研究也主要集中于中药材品种基源的整理以及化学成分的分析。为了充分发挥中国丰富的百合资源优势，进行中药百合的遗传育种，利用RAPD、SSR、AFLP等分子标记研究百合遗传多样性已有报道［3,4］。这些研究中所用百合基因组DNA主要提取自百合幼嫩鳞叶，采样受到季节限制。百合鳞片的采样不受时间限制，但含有较多的次生代谢产物,提取高质量的DNA有一定难度。本研究采用CTAB法从百合鳞片中提取总DNA,检测所提取DNA的浓度和纯度,为SRAP分析以及百合品种亲缘关系的研究奠定基础。1材料与方法1.1材料卷丹百合（LiliwnlancifoliumThunb.）鳞片采集于江西万载县白水乡。新鲜百合鳞片清水冲洗后用70%（体积分数，下同）的乙醇消毒，无菌水冲洗3次，于-80°C冰箱保存备用。主要仪器包括超低温冰箱（MDF-382E（N））、水浴锅（HH-4）、离心机（TGL-16B）.基因扩增仪（XP-G）、双稳定时电泳仪（DYY-6C）、紫外分光光度计（UV-2000）、凝胶成像系统；主要试剂NaChCTAB、EDTA、Tris、B-疏基乙醇、氯仿、异戊醇、异丙醇等均为分析纯，引物由赛百盛基因技术有限公司合成，PCR反应体系试剂购自宝生物工程（大连）有限公司。1.2方法1.2.1CTAB法提取百合鳞片中总DNA[5]取2g百合鳞片用液氮研磨成粉末放入1.5mL离心管中，加入700uL65°C预热的CTAB提取缓冲液(2.5mol/LNaCl.2%CTAB.0.05mol/LEDTA、0.1mol/LTris、0.01mol/LB-硫基乙醇)，轻轻摇匀，65°C水浴60min,期间轻晃3次；再加700uL氯仿一异戊醇(体积比24:1)，轻轻颠倒混匀10min,10000r/min离心10min,转移上清液至一新管中；加入等体积-20°C预冷的异丙醇混匀，-20°C放置30min,10000r/min离心15min；弃上清液，70%的乙醇沉淀，无水乙醇洗涤，室温挥干乙醇；无菌超纯水在4°C下溶解DNA,-20°C保存。1.2.2DNA质量的检验①紫外分光光度法。将所得DNA提取液稀释200...