热疗联合氟尿嘧啶影响胃癌MKN细胞的体外抑制凋亡的研究

热疗联合5氟尿卩密噪影响胃癌MKN45细胞的体外抑制、凋亡的研究张祎1杨卫东1于惠玲2通讯作者1・河北保定市第二医院河北保定071000;2•河北大学附属医院河北保定071000【摘要】目的观察5氟尿卩密噪(5—Fu)温热化疗对人胃癌MKN45细胞的体外抑制、凋亡的效果•方法根据预实验确定工作浓度•实验四组.MTT法检测细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术和逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)观察细胞凋亡及对survivin和Bel-2表达变化•结果热化疗组对MKN45细胞抑制、促凋亡作用最明显;热化疗组Bel—2与survivin下调最显著.survivin与Bel—2蛋口的表达呈正相关性,细胞凋亡率与两种蛋口表达负相关•结论热化疗能增加对MKN45细胞的抑制及凋亡作用,可能与下调Bel—2和survivin的表达有关.【关键词】热化疗;5氟尿卩密唳;胃癌;凋亡;Bel-2;survivinTheinhibitiveeffectandapoptosisofGastriccarcinomacelllineMKN45withhyperthermiaand5—FuinvitroZHANGYI(MedicalOncology’secondHospitalofhebeibaoding,HeGbeiProvinee,071000)[Abstract]Objective:Toobservetheinhibitiveeffect,apoptosisofMKN45cellswith5Fuandhyperthermia•Methods:MTTassaydeterminetheworkingconcentration•ThecellGsweredividedintofourgroups.FCMandRT—PCRdeterminetheapoptosisrates’Bcl—2andsurvivinexpression.Results:5—Futhermo—chemotherapyshowedinhibitiveeffect>downregulateexpressionofthem.Thecorrelationbetweenthemispositive,apoptosisandprotionexpressionisnegative.Conclusion:5—Futhermo—chemotherapyinhibitcell)ncreasestheapopGtosis’t【Khreoyuwgohrtdhse]down—regulationofthem-5—Fu;thermo—chemotherapy;gastriccarcinomaA;bcl—2;survivinChineseLibraryClassification:R735.2R730.58Documentcode:A【中图分类号】R735・2【文献标识码】A【文章编号】1008—6315(2015)12—0391—01导言近3O年来,胃癌的发病率和病死率均居首位•恶性肿瘤的发展,是由于细胞的无限增殖、凋亡障碍所致•热化疗能明显诱导细胞的凋口1].survivin和Bel—2是主要凋亡抑制分子•该实验通过观察热化疗诱导胃癌细胞凋亡,研究二者作用机制,为临床治疗提供实验依据・1材料和方法1・1药品与试剂5氟尿喀呢;四氮甲卩坐蓝;兔抗人survivin^Bcl-2单克隆抗体洋抗兔FITC-|gG,RT-PCR试剂盒;引物.1・2细胞培养细胞接种于RPMI1640培养液中,37°C恒温,5%CO2环境中培养,对数生长期细胞进行实验.1.3细胞的分组与处理对照组细胞37°C常规培养;化疗组加入5一FU;热疗组43°C水浴加温60min(温度波动幅度&le;&plusmn;0・2°C);温热化疗组方法同上.1・4MTT法确定测定细胞增殖抑制率将细胞以5&times;104个??mL-1密度接种于96孔培养板.24h后加药和(或)加温,继续培养后加MTT,加二甲基亚飒,用全自动酶标仪测OD值,细胞增殖抑制率=(对照组OD均值—实验组OD均值)/对照组OD均值&times;100%(公式一).1.5凋亡率的测定收集各处理组细胞,以凋亡指数计算凋亡率於1=[细胞总数一(G0/G1+S+G2/M洛时相细胞数]/细胞总数&times;l00%(公式二)1.6测定Bel—2,survivin的蛋片表达取1ml单细胞悬液,分别加入100&mu;l兔抗人survivin和Bel—2抗体和FITC—IgG二抗测蛋白表达量以均道值表示.1・7RT-PCR检测基因表达提取细胞总RNA.Bcl-2上游引物5&prime;-GAACGTAAGGGTATGAAGGA一3&prime;下游引物5&prime;-CACTGGGTAAGACTAAAGG一3&prime;,扩增产物205bp;survivin±游引物5&prime;-CATGGCCTGTCAGAAAATAC一3&prime;下游引物5&prime;-TAACCCGAGTAAGAATGTGC一3&prime;扩增产物176bp;内参上游引物5&prime;-AGGGAAATCGTGCGTGACATCAAA一3&prime;下游引物5&prime;-ACTCATCGTACGCGCTGCTTGCTGA-3&prime;扩增产物478bp•经过循环后终止反应•结果以两者光密度的比值表示•表达强度&ge;O・10的值定为阳性.1.8统计学处理采用SPSS软件进行单因素方差分析、直线相关与回归分析,P<0・05定为显著性标准.2结果2.15-fu浓度的确定5-fu对MKN45细胞抑制作用存在时间、浓度依赖性(表1)・2.2细胞增殖抑制率和凋亡率测定各处理组均有抑制作用,热化疗组细胞抑制率及...

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