基序变异检测在六君解毒汤治疗慢性乙型肝炎患者中的应用研究徐连江李升玲齐梅卜文红沙莎陈红梅［摘要］目的：探讨六君解毒汤治疗1年后慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV・DNA聚合酶活性区发生基序变异的状况及其检测方法。方法：采用荧光定量PCR法检测血清HBVDNA含量”荧光PCR法和变性高效液相色谱法检测HBV-YMDD基序变异。结果：122例CHB患者经过六君解毒汤治疗1年后”80例(65.6%)HBV-DNA阴转;在42例HBV-DNA阳性患者屮,20例为YMDD野生型,22例出现YMDD基序变异，变异率达18.0%。结论：CHB患者六君解毒汤治疗1年后，出现较高的YMDD基序变异率。［关键词］六君解毒汤乙型肝炎检测基序变异DOI:10.3760/cma.j.issn.1672-7088.2014.21.19作者单位：徐连江，齐梅，沙莎，陈红梅，262500,山东省青州市，山东省青州市中医院；李升玲，卜文红，262500,山东省青州市，山东省青州市荣军医院。［作者简介］徐连江，本科，主管检验师；李升玲，本科，主管护师；齐梅，本科，主管护师；卜文红，本科，主管护师；沙莎，本科，检验师；陈红梅，硕士，主管医师。TheApplicationofMotifMutationDetectionintheTreatmentofLiujunDetoxificationSoupamongChronicHepatitisBPatientsXuLianjiang,LiShengling，QiMei,BuWenhong,ShaSha,ChenHongmeiAbstract:ObjectiveToinvestigatethemotifmutationsituationofHBV-DNAinthepolymeraseactivityareaamongchronichepatitisB(CHB)patientsafteroneyeartreatmentofLiujundetoxificationsoup.MethodsFluoresceneequantitativePCRmethodwasadoptedtotesttheserumHBVDNAlevel,andfluorescentPCRanddenaturinghighperformaneeliquidchromatographywereconductedtodetectHBV-YMDDmotifmutation.ResultsOneyearafterLiujundetoxificationtreatment,amongallthe122CHBpatients,80cases’(65.6%)HBV-DNAhadrealizednegativeconversion;among42ofHBV-DNApositivepatients,20caseswereYMDDwild-type,and22caseswereYMDDbasesequeneevariation,withamutationrateof18.0%.ConclusionAfterIyearLiujundetoxificationtreatment,CHBpatientsappearedcomparativelyhighYMDDmotifmutationrate.Keywords:Liujundetoxificationsoup;motifmutationdetection;hepatitisB乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一，大部分的慢性乙型肝炎(chronichepatitisB,CHB)患者病程长，相当一部分患者将发展为肝硬化乃至肝癌。近年来，人们发现中药作用有很强的抗乙型肝炎病毒(HBV)作用，如六君解毒汤等,我们研究其治疗过程中患者HBV・DNA聚合酶活性区酪氨酸■蛋氨酸•天门冬氨酸■天门冬氨酸(YMDD)基序中的蛋氨酸发生变异的情况，为临床用药起到指导性的作用。1对象和方法1.1对象:122例CHB患者(男70例，女52例”年龄22~51岁冲位年龄32岁)。其诊断符合1995年全国病毒性肝炎防治方案制定的CHB诊断标准。所有CHB患者均接受六君解毒汤治疗1年。应用六君解毒汤治疗，汤药组成:党参、白术、茯苓、甘草、麦芽、丹参、半枝莲各制半夏、陈皮、郁金、茵陈各6爲叶下珠30g等。由医院药剂科用JS-819多功能中药煎煮仪(广州市今健医疗器械有限公司)煎煮，每剂药煎煮取汁500mL,分两次服。1天1齐IJ。治疗前血清HBsAg、HBeAg、HBcAb和HBVDNA均为阳性，并排除其他肝炎病壽的感染。1.2主要试剂和仪器:HBV-DNA荧光PCR试剂盒、HBV・YMDD基序变异荧光检测试剂盒(深圳匹基生物工程公司),Taq酶(AppliedBiosystems公司),dNTP(大连宝生生物工程公司)，引物(上海博亚生物工程公司),Ligh-tcyclerll型荧光PCR仪(德国罗氏公司),DHPLCWave系统・3500型分析ft(Transgenomic公司),Hema240型PCR仪(珠海黑马医学仪器公司)。1.3荧光定量PCR检测HBV・DNA:利用HBV-DNA荧光定量PCR试剂盒、Ligh-tcyclerII荧光PCR仪测定,PCR程序如卜:37±3min?92±lmin,;92±5s,60±30s?共40个循环。1.4荧光PCR法检测HBVYMDD基序变异:⑴在Ligh-tcyclerll荧光PCR仪进行HBVP区基因片段的扩增。(2)将PCR产物进行熔解温度曲线(Tm)分析,计算出Tm值。根据所测得的Tm值推断HBVYMDD基序[YMDD:(50.0±1.5)zYIDD:(42.5±1.5),YVDD:(59.0&...