东北寒区肉羊新品种群FecB基因鉴定与基因频率分析刘学峰张立春李梦姝王伟霞佟桂芝海龙李信涛---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除------本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---摘要：本试验旨在对两个东北寒区肉羊新品种群体进行FecB基因鉴定和基因多态性分析。通过提取两个群体个体外周血基因组DNA样品，基因组PCR直接测序和HRM法检验，结果发现两个群体中均含有FecB基因，但无论从基因型频率还是等位基因频率均存在明显差异。首先肉毛兼用型群体只含有少量B+基因型个体，B等位基因频率只有3%左右，且处于Hardy-Weinberg平衡状态。多胎型群体中FecB基因含量则显著提高，BB和B+基因型频率依次上升至7%和25%左右，且处于Hardy-Weinberg不平衡状态，说明FecB基因在该群体中受到较为强烈的选择压力。如需利用两个群体进行兼具产肉性能和高繁殖性能肉羊新品种（系）培育，较为理想的策略是在进一步提升两个群体优良特性的前提下，开展两个群体间杂交。关键词：绵羊;FecB基因;基因频率：S826文献标识码：A：2095-9737（2020）03-0004-03东北寒区肉羊新品种群是外来品种，主要是高繁殖率小尾寒羊和高产肉性能的德国肉用美利奴羊分别与当地东北细毛羊，半细毛羊杂交，自然选育形成的地方杂交品种群体，具有耐寒、耐粗饲等优点，按性能可细分为肉毛兼用型和多胎型两种类群[1]。两类自然杂交群体分布广泛，群体规模大，进一步可利用两种类型品种种群优势培育适应东北气候环境的兼具产肉与多胎性能的肉羊新品种（系）[2，3]。FecB基因是影响绵羊排卵率和繁殖力的主效基因，目前在国---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---内外具有高繁殖特性的绵羊品种中均发现该基因的存在[4-6]。FecB基因作为成熟的高繁殖性状筛选标记已广泛应用于多胎绵羊品种选育，收到良好的效果[3]。本文以東北寒区肉羊新品种种群为研究对象，利用HRM技术对该群体中FecB基因鉴定及多态性分析，初步证实该群体中存在FecB基因且多胎型群体具有较高基因频率，为利用FecB标记筛选高产肉高繁殖特性地方肉羊新品种奠定基础。1材料与方法1.1实验样品采集及主要试剂和仪器实验动物为东北寒区肉羊新品种种群，主要包括肉毛兼用型和多胎型两种类群，两者均来自国家肉羊核心育种场黑龙江农垦大山羊业有限公司。血液样品DNA采集参照试剂盒说明书进行。血基因组DNA制备试剂盒购自Axygen公司;高保真PfuDNA聚合酶购自Solarbio公司;基因分型试剂盒LightCycler480HighResolutionMeltingMaster购自罗氏公司;实时荧光定量PCR仪为罗氏公司LightCycler480II。1.2引物设计与合成绵羊FecB基因实际为骨骼形态发生蛋白受体1B（BMPR-1B）基因外显子6上发生的A746G突变。为检测该突变，采用BeaconDesigner7.9软件设计BMPR-1B基因外显子6部分序列克隆及HRM检测引物（BMPR-1B基因登录号：NC_040257），引物信息见表1。引物由苏州金唯智生物科技有限公司合成。1.3BMPR-1B片段扩增与FecB基因鉴定PCR反应体系为25μL：10×PCRBuffer2.5μL，dNTPs（2.5mmol/μL）2.5μL，FecB_CF和R引物（10mmol/μL）各0.5μL，DNA模板（50ng/μL）1.0μL，PfuDNA聚合酶（5.0U/μL）0.2μL，ddH2O17.8μL。扩增条件：95℃预变性5min，95℃变性30s，60℃复性30s，72℃延伸30s，35个循环，72℃延伸5min，12℃保存。扩增产物1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。符合要求的PCR产物直接送生物公司测序。1.4东北寒区肉羊新品种群FecB基因型频率分析以大山羊业所采集的肉毛兼用型和多胎型两种类群体为检测对象，以所构建的FecB基因HRM检测体系检测上述品种中FecB基因频率。HRM反应体系为10μL：HighResolutionMeltingMaster5μL，MgCl2（25mmol/μL）1.2μL，FecB_H正反引物各0.1μL，模板DNA（20ng/μL）0.5μL，ddH2O为3.1μL。反应程序如下：首先95℃预变性10min;随后扩增45个循环，每个循环温度依次为94℃保持15s，退火温度62℃保持30s;扩增结束后进行HRM分型，分型条件为：95℃保持1min，40℃保持1min，65℃---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除--...