聊城地区手足口病病原构成的临床研究［摘要］目的探讨聊城地区手足口病(HFMD)的病原构成及临床特点。方法采集2010年6月聊城地区240例HFMD患者(包括23例重症患者)咽拭子并提取病毒RNA。采用real-timeRT-PCR方法，以肠道病毒5,UTR区通用引物及探针对病毒RNA进行初步筛查，初筛阳性标本进一步采用CA16及EV71VP1区特异性引物及探针进行型别鉴定。结果普通患者EV71阳性143例、CA16阳性6例、其他肠道病毒阳性21例；重症患者中EV71阳性率达82.6%(19/23),CA16感染未见引起重症。结论聊城地区HFMD患者以1〜3岁儿童为主，男性高发于女性，农村高发于城市；HFMD的病原包括EV71、CA16及其他肠道病毒,主要病原为EV71,且EV71感染容易引起重症并发症。［关键词］手足口病；柯萨奇病毒；肠道病毒［中图分类号］R512.5［文献标识码］B［文章编号］1674-4721(2014)01(a)-0163-03手足口病(handfootmouthdisease,HFMD)是由肠道病毒引起的急性传染病，常发生于学龄前儿童，以〈3岁儿童的发病率最高，表现为发热和手、足、口腔、臀、膝等部位的皮疹、斑丘疹，少数病例可出现无菌性脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、肺水肿、循环衰竭等并发症，个别出现脊髓灰质炎样麻痹后遗症，甚至死亡。肠道病毒为IIFMD病原，主要为柯萨奇病毒(Coxsackievirus)A组部分血清型,如A2、A4^A5^A8、A10>A16；部分B组---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---柯萨奇病毒血清型,如B2、B4；埃可病毒(ECHOvirus)和肠道病毒(enterovirus)71型，以CA16和EV71型常见。为了解本地区HFMD病原构成及临床特点，本研究采集一定时期HFMD患者鼻咽拭子进行了real-timeRT-PCR检测，现报道如下。1资料与方法1.1一般资料选择2010年6月1〜9日聊城市人民医院HFMD门诊依据原卫生部《手足口病诊疗指南2010年版》诊断为HFMD的240例患者，其中，男143例,女97例；年龄6个月〜40岁(8、12、14、33、40岁各1例)，平均3.2岁。轻型患者217例，重症(并发脑炎、脑脊髓炎、脑膜炎、肺水肿、循环衰竭及心肌炎即为重症)患者23例；并发脑炎7例，并发脑炎、肺炎11例，并发肺炎1例；农村178例，城市62例。1.2标本采集由专业医护人员用专用釆样棉签，适度用力拭采咽后壁和两侧扁桃体部位，避免触及舌部，迅速将采样棉签放入装有保存液的外螺旋盖采样管中，旋紧管盖，密封以防止干燥，在采样管外注明标本唯一性编号。2h内送达实验室，超低温(-80°C)冷冻保存。采集鼻咽拭子置病毒保存液中，送实验室由专业人员严格按操作程序检测。1.3标本检测咽拭子于标本保存液中充分振荡20min,洗下拭子上粘附的病毒及含有病毒的细胞等，冻融1次使细胞破裂，释放病毒颗粒，并在4°C条件下---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---10000r/min离心20min。采用北京金豪制药股份有限公司(简称“北京金豪”）生产的核酸分离试剂盒（硅胶膜吸附法），按试剂盒说明书提取病毒RNAo所得RNA首先应用针对肠道病毒5’UTR区的肠道病毒通用引物荧光检测试剂盒（北京金豪）进行realtimeRT-PCR检测，阳性标本再以分别针对EV71和CA16VP1基因的肠道病毒EV71和CA16型双通道荧光检测试剂盒（北京金豪）进行型别鉴定。扩增体系及循环程序均参照试剂盒要求，在RocheLightCycler480II_b完成扩增。1.4结果的判读与分析根据RocheLightCycler480II分析软件进彳亍分析，得到各标本的肠道病毒通用性RNA的检测结果。每次试验应设置阳性对照和阴性对照，且应符合以下要求，否则试验结果不成立：无Ct值或Ct值为0报告该反应阴性;Ct值W37.0报告该反应阳性;37.0<01值〈40.0为灰区。2结果〈3岁儿童占64.2%,〈5岁儿童占87.2%,EV71阳性患者143例，CA16阳性患者6例，其他肠道病毒21例（表l）o19例EV71阳性重症患者中,农村患儿占68%（13/19）,城市患儿占32%（6/19）；〈1岁患儿中，男5例,女1例；2岁以下患儿男6例、女1例；3岁以下患儿男3例、女0例；4岁以下患儿男女均0例;5岁以下患儿男3例、女0例；男性占89%（17/19）,女性占11%（2/19）o3讨论HFMD是山肠道病毒感染引起的儿童传染病，传染性强，传播途径广，速度快，流行强度大，短期内可引起大流行。1957...