半枝莲多糖季胺碱抑制食管癌细胞增殖试验研究(河南现代医学研究院中医院河南郑州450000)【摘要】目的：探讨半枝莲多糖季胺碱对食管癌EC9706细胞的抑制作用及可能机制。方法:通过MTT法检测SBPS(3个浓度100、200、300txg,/ml)对食管癌细胞的增殖的作用。结论：SBPS对食管癌细胞的增殖有抑制作用。【关键词】半枝莲多糖季胺碱；EC9706；协同抗肿瘤作用【】R73-3【文献标识码】A【】1007-8231(2016)11-0063-02【Keywords】Achyranthesbidentatapolysaccharidesquaternaryaminealkali;EC9706;Anti—tumorcooperationaction河南是食道癌高发区，食管癌死亡率仅次于胃癌，居恶性肿瘤死亡率的第二位，尽管早期食管癌可以通过手术缓解，但大多数患者发现时已是晚期，化疗药物的使用对正常细胞有毒是亟待解决的问题，中药有很大的探讨价值。1•目的研究半枝莲多糖SBPS的体外抗肿瘤作用。半枝莲是唇形科植物半枝莲(ScuteuariabarbataD.Don)的干燥全草，又名狭叶韩信草、并头草。半枝莲多糖SPBS平均分子量为lOOOOkD,糖基的组成为鼠半枝莲在临床治疗癌症中的应用十分广泛，多与白花蛇舌草、半边莲等组成复方配伍用于多种肿瘤的治疗。2.材料与方法2.1主要试剂和仪器食管癌细胞株EC9706由新乡医学院病理教研室提供；SBPS粉末由新乡医学院机能实验室提供[1-3];醚化剂3-氯-2羟丙基三甲胺氯化物，购自武汉试剂公司。2.2半枝莲多糖季胺碱制备:称取SBPS粉末100g,醚化剂4.7g,水133.4g氢氧化钠2.0g。然后将它们混合放到一个500ml的圆底烧瓶，置于5(TC的水浴中，开动搅拌器进行搅拌，反应混合物在该温度下保持反应若干个小时。反应结朿吋把圆底烧瓶的溶液倒入一个500ml烧杯加入20ml去离子水以减少粘度这吋用PHS-3C精密pH计测量反应结束时的pH值用lmol/LHCI中和至pH6.5左右，过滤干燥，即可得样品。分析测量含氮量，取代度及反应效率。2.3细胞培养EC9706细胞用含10°%胎牛血清、100mg/ml链霉素、100mg/ml青霉素的RPMI1640培养液培养，放在37°C,5%CO培养箱中培养至对数生长期。2.4细胞生长抑制试验MTTMTT比色法测定细胞增殖抑制率。收集对数生长期细胞接种于96孔板中，调整细胞密度为l105个?ml-1,每孔100mu;l。每个剂量设12个平行孔，分别培养12,24和48h,加入5g?L-l四甲基唑氮蓝20mu;l,继续培养，4h后，弃培养液，加入DMS0150mu;l,完全显色后，采用酶标仪测定各孔490nm(OD)值。按下列公式计算细胞生长抑制率(Inhibitionmte，IR)。IR=(对照组OD—实验组OD)/(对照组OD—空白组OD)100%o2.5统计学处理应用SPSS19.0统计软件进行统计学处理。采用单因素方差分析比较各单独处理因素效应。3.结果3.1不同浓度SBPS对EC9706细胞增殖的影响见表I，MTT比色法显示，对照组细胞呈现正常的生长周期，不同浓度的ABPS随着浓度增加与对照组相比较有明显差异。表I不同浓度对EC9706细胞增殖的影响(x-plusmn;s，n=6)组别抑制率对照组7.00plusmn;3.14低剂量组(100mu;g/ml)20.00plusmn;0.23中剂量组(200mu;g/ml)26.79plusmn;0.64高剂量组(300mu;g/ml)35.14plusmn;0.75F31.5P《0.013.结论半枝莲多糖季胺碱对食管癌细胞的增殖右显著抑制作用。4.讨论半枝莲抗肿瘤作用己基本得到肯定，对消化、呼吸、生殖等系统的恶性肿瘤具有较好的抑制作用［4-8］,甚至对某些白血病也有一定的治疗效果。0前我国学者正在对半枝莲多糖抗肿瘤的机制进行深入研究，致力于将它向临床推广。癌细胞带负电荷，半枝莲多糖季胺碱带正电，半枝莲多糖季胺碱化提高它与癌细胞结合力。半枝莲多糖季胺碱衍生物的实验，为探讨增加它对癌细胞的杀伤力提供了一条可行的路径［9-10］。【参考文献】［1】王志远，戴玲，朱业云，等.半枝莲酸性多糖SBPs的纯化、性质及抗氧化活性研究［」］.中草药，2009,40(5):728-731.［2】袁延强，韩利文，王希敏，等.半枝莲化学成分及抑制血管生成活性的研究［J］.中国药学杂志，2012,47(13):1032-1035.［3】马维坤，仰榴青，吴向阳，等.半枝莲多糖提取工艺及其免疫活性初步研宄［J］.江苏大学学报(医学版)，2007，17⑷315-3181.［4】王莹.中药半枝莲的研究探讨［」］.临床合理用药，2013,6(10):58.［5】马欢杰，多糖类抗肿瘤作用研究进展...