芽抱杆菌P3的分离鉴定及其生长条件的试验研究李帆，杨莹，查诚(安庆医药高等专科学校，安徽安庆246003)摘要目的：从污水处理池的污泥中分离得到兼性厌氧的菌株，对其进行分类鉴定。方法:根据维诺格拉斯基柱法分离出儿种纯菌株，选取其中生长较好的一株，经形态观察和生理生化实验以及16SrDNA测定，鉴定其分类地位。研究不同培养条件对该菌生长的影响。结果：获得一纯菌株P3,初步推测该菌为Bacillussp.,经16SrDNA鉴定其为Bacillussp.。其最适生长条件为：温度29°C,初始pH值7.0,盐度0.1%以及摇床(100r/min)培养。结论：经形态观察和生理生化实验推测P3菌的分类地位具有一定的准确性.关键词芽抱杆菌；16SrDNA；鉴定：Q93-33IsolationandIdentificationofBacillussp.StrainP3andOptimumConditionsLiFan,YangYing,ZhaCheng(AnqingMedicalAndPharmaceuticalCollege,Anqing246003,Chirm)Abstract:Objective:Astrainwhichwasisolatedfromsludgesoffertilizerplantwasidentifiedanditsoptimumconditionswasstudied・Methods:SeveralstrainswereisolatedwiththemethodofWinogradskycolumn.Thestrainwhichoutgrewotherswasidentifiedaccordingtomorphologicalobservation,biochemicalandphysiologicaltestandlGSrDNA・Thenitwascultivatedonvariousconditions・ResuIts:ThestrainnamedasP3wasidentifiedasBacillussp・•Theoptimumconditionsforthegrowthofthestrainwere:temperature29°C,initialpH7.0andshakingatlOOr/min.Conclusion:Itwasrevealedbythisstudythatmorphologicalobservation,biochemicalandphysiologicaltestwasaccurateforidentificationofbacteria・Keywords:Bacillussp.;16SrDNA;wastewater;identify作者简介：李帆(1983—),女硕士,研究方向：生物技术。0引言细菌基因提取鉴定的方法具有繁琐和费用高的缺点，而形态观察以及碳氮源实验和生理生化实验等初步鉴定方法操作简单，费用低，因此木试验从四方化工集团的污水处理池中采集污泥，根据维诺格拉斯基柱法⑴，分离得到一株纯菌株，通过对该菌的分类、生长特性进行了试验研究，然示和16SrDNA鉴定结果进行对比，旨在证明初步鉴定方法在细菌鉴定中具有一定的准确性。1材料与方法1.1材料1.1.1实验材料采自合肥市四方化工集团污水处理池中的污泥。1.1.2试剂生物素、烟酸由北京索莱宝科技有限公司生产的分析纯试剂，细菌通用引物，27F(5'AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3,)、1492R(5'GGTTACCTTGTTACGACTT35),以及上海生工的TaqDNA聚合酶、dNTP.MgCl2其余均为国产分析纯。1.1.3仪器座式自动电热压力蒸汽灭菌器；电了天平；微量高速离心机；LRH-250A生化培养箱；ZHWY-2102C新型恒温震荡器；WFVUV-2100分光光度计；电泳仪；凝胶成像仪。1.1.4培养基%分离培养基：氯化ISl.Og,碳酸氢钠l.Og,磷酸氢二钾0.2g,乙酸钠3g,七水硫酸镁0.2g,氯化钠0.5〜2g,生长辅助因了(维生素Bl,烟酸,对氨基苯甲酸，生物素)数毫克数十毫〜克,蒸馅水1000ml,无机盐类溶液10ml,pH7.0o无机盐类溶液：六水氯化铁5mg,五水硫酸铜0.05mg,硼酸lmg,四水氯化猛0.05mg,七水硫酸锌lmg,六水硝酸钻0.5mg,蒸镉水1000mlo%生长培养基：氯化钠0.5g,乙酸钠lg,硫酸镁0.25g,磷酸二氢钾0.25g,YE0.5g,去离了水50OmL,pH8.0。1.2.1菌株的富集、分离以及生理生化特性在取样点污水处理池中取得污泥，加入500mL量筒中，污泥量约为量筒的一半体积，然示在量筒中加满水，用保鲜膜封口，置于阳光下静止培养一个月。根据维诺格拉斯基柱法工,取出部分水与污泥分界处液体接入到生长培养基中培养3d。再在固体分离培养基上进行划线分离，经过多次分离纯化得到几种纯菌株，选取其中一株生长效果较好的菌株命名为P3。菌株P3的生理生化特性研究，包括革兰氏染色，明胶水解实验，淀粉水解实验，硫化氢实验,糖发酵实验，阿味实验彳和接触酶实验，青霉素敏感性实验疋。以分离培养基为基础培养基，用3g/L的丙酸钠，乙醇，谷氨酸钠，柠檬酸钠，硫代硫酸乍内和葡萄糖代替乙酸乍内作为唯一碳源进行碳源实验；以分离培养基为基础培养基，用lg/L的氯化馁，蛋白豚，天门冬酰氨，亚硝酸钠，硝酸钠和尿素代替氯化銭作为唯...