G蛋白耦联雌激素受体GPER在肝脏缺血再灌注损伤中的表达及调控机制研究秦勇王超君徐胜前潘德标王世【摘要】目的：探究G蛋白耦联雌激素受体GPER在肝脏缺血再灌注损伤中的表达及调控机制研究。方法：选取2-3月龄成年雄性SD大鼠30只（體重约350±20g）构建大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型，分为假手术组（PO组）、肝缺血再灌注组（IR组）及雌激素预处理+肝缺血再灌注组（IRE组）各10只。采用按体重经腹腔给予17-β雌二醇4mg/kg于造模前1小时处理大鼠，造模36h后，比较分析在肝脏缺血再灌注损伤中，G蛋白耦联雌激素受体GPER的表达和调控机制。结果：与对照组相比，术后转氨酶明显较低，差异有统计学意义（P<0.05）、炎症因子TNF-α及IL-6水平下调，此外，GPER的表达在模型组中显著下调，雌激素预处理上调GPER的表达水平。结论：在肝脏缺血再灌注损伤中采用雌激素预处理改善大鼠肝功能，提高G蛋白耦联雌激素受体GPER的表达，降低TNF-α及IL-10水平，减轻肝脏缺血再灌注损伤，安全有效，具有临床应用价值。【关键词】肝脏缺血再灌注损伤;调控机制;G蛋白耦联雌激素受体GPERR843A1672-3783（2020）10-30--02在大脑中雌激素发挥关键性作用，能够调节痛觉和情绪，以及突触可塑性和认知功能，大多经雌激素核受体ERβ和ERα介导调控[1]，雌激素也能经膜结合雌激素受体，如出现慢性疼痛和情绪障碍等，大脑的神经系统功能受G蛋白耦联雌激素受体（GPR30）介导[2]。另外，也有研究表明雌激素在肠缺血[3]、脑缺血[4]以及肾脏缺血[5]的过程中具有显著的保护作用。然而，雌激素在缺血再灌注损伤中发挥的作用及受体相关机制仍不清楚。在本研究中，我们构建了---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型并使用雌激素预处理，检测了转氨酶活性及炎症因子TNF-α及IL-6水平，并探讨了GPER的表达变化。旨在阐明G蛋白耦联雌激素受体GPER在肝脏缺血再灌注损伤中的表达及调控机制。1资料与方法1.1选取2-3月龄性成熟的成年雄性SD大鼠30只（体重约350±20g），分为假手术组（PO组）、肝缺血再灌注组（IR组）及雌激素预处理+肝缺血再灌注组（IRE组）各10只。各组缺血再灌注后36h后各随机选取5只存活大鼠，经心脏穿刺采血检测血清ALT、LDH、TNF-α及IL-6水平，并于肝中叶的相同部位取肝组织样本检测GPER的mRNA表达。1.2方法术前12h禁食，腹腔内注射1%戊巴比妥钠溶液30mg/kg麻醉，上腹部正中切口开腹，断离肝周韧带后分离肝门部脉管，以无创伤小血管夹夹闭左外及中叶的肝动脉、门静脉造成70%肝脏缺血，45min后重新开放血供并切除未阻断血供的30%肝叶，造成肝切除肝缺血再灌注模型。雌激素处理组于造模前1小时按体重经腹腔给予17-β雌二醇4mg/kg，其余两组则于术前1小时经腹腔给予同等容积的生理盐水。术后36h收集血液及组织样本进行相关检测。1.3观察指标：采用生化检测试剂盒（南京建成）检测AST及ALT活性，ELISA试剂盒（南京建成）检测NF-α及IL-6水平。采用荧光定量PCR检测GPER的表达;根据GPER在基因数据库的序列信息，设计合成PCR引物：GPER-F：TCTAAACTGCGGTCAGATGTGGCT;GPER-R：TTTCCTGGTCGACGGTGTCAGAAA。抽提总RNA，采用Takara公司的cDNAReverseTranscriptionKit逆转录合成cDNA。采用Takara公司SYBRGreenPCRMIX试剂盒及ABI7300RealtimePCR系统扩增检测。计算用内参标准化的CT值并进行mRNA表达分析。1.4统计学处理：选择SPSS23.0统计学软件实施数据分析，用均数±标准差（M±SD）代表计量资料，选择t检验检测两组间情况，P<0.05表示差异有统计学意义。2结果雌二醇处理组与未处理组术后肝功能比较：采用按体重经腹腔给予17-β雌二醇4mg/kg于造模前1小时处理大鼠，与对照组相比，术后转氨酶明显较低，差异有统计学意义（P<0.05）。此外，炎症因子TNF-α及IL-6的表达水平在模型组中显著上调，并被雌激素预处理显著抑制（P<0.05），见表1。另外，GPER的mRNA表达在模型组中显著下调（36.67%，相较于P0组），但被雌激素预处理显著上调（78.49%，相较于P0组）（P<0.05）。3讨论---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---◁文笔绘梦...