6种黄连饮片中6种生物碱的RPHPLC含量测定及与“治消渴”药效学的谱效关系分析赖先荣+周邦华+杜明胜+郑海杰+耿志鹏+李佳川+孟宪丽+张艺+张静[摘要]建立生品、姜炙、醋炙、酒蒸、酒炙、萸炙6種黄连饮片中6种生物碱（盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱）的含量测定方法，并结合药效学结果探索其与药效学研究结果及中医疗效之间的关系。采用WelchXtimateTMC18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，以0.1%三乙胺溶液（用碳酸氢铵和氨水调节pH10）为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱（0～15min，10%～25%B；15～25min，25%～30%B；25～40min，30%～45%B），流速1.0mL·min-1，柱温30℃，检测波长270nm。6种生物碱分别在0.85～16.96mg·L-1（r=0.9997），1.25～24.96mg·L-1（r=0.9999），2.05～40.96mg·L-1（r=0.9999），3.65～72.96mg·L-1（r=0.9999），2.88～57.06mg·L-1（r=0.9998），13.25～264.96mg·L-1（r=0.9996）呈现良好的线性关系，平均加样回收率（n=9）分别为102.4%（RSD1.2%），101.8%（RSD1.3%），100.3%（RSD1.8%），100.7%（RSD1.8%），101.2%（RSD1.5%），97.90%（RSD2.0%）。测定6种黄连饮片共36个批次的6种生物碱的平均质量分数分别为3.55，4.49，9.12，19.17，15.69，62.56mg·g-1。该文建立含量测定方法准确性高、重复性好，可用于6种黄连饮片中6种生物碱的含量测定。采用主成分分析、分层聚类分析对含量测定及前期药效学研究结果进行数据分析，结果表明酒蒸、酒炙、萸炙3种黄连饮片与生品黄连饮片存在明显差异，酒蒸饮片与生品饮片具有最大的差异，其差异主要与血清甘油三酯（TG）、空腹血糖水平（FBG）有关，另外，盐酸非洲防己碱是6种生物碱成分中影响最大的生物碱成分。酒蒸、酒炙、萸炙3种黄连饮片用于中医临床“治消渴”（防治糖尿病）更有优势，特别是在治疗糖尿病高脂血症方面。[关键词]黄连饮片；HPLC；盐酸药根碱；盐酸非洲防己碱；盐酸表小檗碱；盐酸黄连碱；盐酸巴马汀；盐酸小檗碱；含量测定；药效学；主成分分析；分层聚类分析[Abstract]Toestablishamethodfordeterminingthecontentsofsixalkaloids（jatrorrhizinehydrochloride，columbaminehydrochloride，epiberberinehydrochloride，coptisinehydrochloride，palmatinehydrochloride，berberinehydrochloride）insixtypesofCoptidisRhizomapieces（crudepieces，gingerjuicestir-friedpieces，vinegarstir-friedpieces，winesteamedpieces，winestir-friedpieces，evodiaejuicestir-friedpieces）byRP-HPLC，andexploretherelationshipwiththecurativeeffectoftraditionalChinesemedicine（TCM）andpharmacodynamicsresults.ThechromatographiccolumnwasWelchXtimateTMC18（4.6mm×250mm，5μm），with0.1%triethylaminesolution（adjustpHat10withammoniumbicarbonateandammonia）asmobilephaseAandacetonitrileasmobilephaseBforgradientelution（0-15min，10%-25%B；15-25min，25%-30%B；25-40min，30%-45%B）atarateof1.0mL·min-1.Thecolumntemperaturewassetat30℃，andthewavelengthwassetat270nm.Thesixalkaloidsshowedagoodlinearrelationshipwithintherangeof0.85-16.96mg·L-1（r=0.9997），1.25-24.96mg·L-1（r=0.9999），2.05-40.96mg·L-1（r=0.9999），3.65-72.96mg·L-1（r=0.9999），2.88-57.60mg·L-1（r=0.9998），and13.25-264.96mg·L-1（r=0.9996）respectively.Theaveragerecoveries（n=9）ofthesixalkaloidswere102.4%（RSD1.2%），101.8%（RSD1.3%），100.3%（RSD1.8%），100.7%（RSD1.8%），101.2%（RSD1.5%）and97.90%（RSD2.0%）respectively，andtheiraveragecontentswere3.55，4.49，9.12，19.17，15.69，62.56mg·g-1，respectively.Thisdeterminationmethodwasaccurateandrepeatable，whichcouldbeusedforthecontentdeterminationinsixtypesofCoptidisRhizomapieces.Dataanalysisoncontentsdeterminationandpreliminarypharmacodynamicsresultswasconductedbyusingprincipalcomponentanalysis（PCA）andhierar...