文章编号：1000-6281(2012)024)1844)6奶牛乳腺发育过程中整联蛋白a6、B4表达定位的研究刘畅'，赵锋2,李庆章'(东北农业大学1.乳品科学教有部重点实脸空；2.食品学院;3・生命科学学院；黑龙江哈尔«150030)摘要：为了解初牛乳腺发育与挞联妥白a6、04表达的规算，作才取荷斯坦奶牛孔廉俎织，制卜冰冻切片.进行免疫荧光标记，在激光共聚魚显微钱下现案°结果显示，族联炙白a6的荧光住号存崔于乳朦导管和腺泡墓底一何佃胞的基廉细胞质篠上，整联蛋白04主妥分布于腔上皮细胞的基底侧、相邻腔细胞间個腹区城.以及阳绕农腔上皮切胞外网的肌上皮细胞旗上。整联妥白a6、B4在肌上皮细胞和雇底细胞展中也可祉检测到，但是细胞粒内几乎不能扯檢测到。从挞联冬白a6、沪的共定位的部位推测，a6p4异二聚体在导管和凍泡基底侧分布，整联妥白a6在面向导管和腔上皮细胞中表达，但不完全以a6p4异二聚体形式存在。关纏词：奶牛乳腺；免疫荧尢；整联娶白；极性---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除------本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---中图分类号：S858・23；S823・9T；Q336文猷标识码：A整联蛋白(integrin)是细胞黏附分子家族的重要成员之一⑴，是细胞表面重要的黏附分子和信号分子的受体，它山a亚基(120-185KD)和B亚基(90-110KD)构成异二聚体。至今发现脊椎动物中，至少包括24种a亚基和9种卩亚基⑵，组成超过25种不同的整联蛋fl131o整联蛋白通常与多种配体结合，介导细胞的信号传导⑷。整联蛋白a6[J4主要表达于基底层细胞的基底血，以层黏连蛋白为配体，在维持细胞黏附，细胞的宿号转导，细胞凋亡、增殖分化及其迁移等牛•物学行为上可能起着重要的作用。实验证实⑸，尺黏连蛋白与整联蛋白a6、p4的结合可以通过激活MAPK通路调控角质细胞的增殖。有研究发现⑷，整联蛋门a6、04在乳腺癌、甲状腺癌、膀胱癌、结直肠癌和胃癌啦点表达水平均明显增离，而且与肿瘤细胞的恶性程度相关。然而，整联蛋白a6、B4在奶牛乳腺组织中的表达，目前还缺乏研究数据。本文通过免疫荧光标记技术，在激光共聚焦显微镜下，对青春期、奶娠期、围产期、泌乳期和退化期奶牛乳腺上皮细胞中，整联蛋白a6、B4进行了定性与定位分析，为深入了解整联蛋白的表达与乳腺发育及泌乳过程的关系，提供有意义的资料。1材料与方法1.1试剂和仪器小鼠抗整联蛋白«6单克隆抗体(ab21259,Abcom),兔抗整联蛋白P4多克隆抗体(sc-9090,SantaCruz),FITC•山羊抗兔IgG(ab6717,Abcom),TRITC-山羊抗兔IgG(ab7087,Abcom)。山羊血清(北京中杉),Tween-20(北京中杉),Hoechst33258,抗荧光淬灭剂(Sigma)等分别购自各公司。本实验所用的激光共聚焦显微镜为LeicaTCSSP2型、冷冻切片机为LeicaCM1850型。1.2实验材料选择年产量6吨以上的高产荷斯坦奶牛，其生理状态正常，没有疾病记录。屠宰奶牛并采集乳腺组织，液氮速冻，・80弋冰箱保存。根据奶牛乳腺发育生理特点及生长阶段不同，设置如下采样时点：青春期12个月(简称V12M,下同)；虹娠期6个月(P6M)；围产期(WC)；泌乳期1400(L140D)；退化期30日(I30D)。:1.3试验方法131免疫荧光标记方法对每个时期的样品，制备冷冻切片，分别用于整联蛋口a6和p4单克隆抗体的双重免疫标记，或用于多克隆抗休免疫标记的比较实验。双重标记步骤如下：切片自冰箱中取出恢复至室温,在预冷4咒内酮固定10min,风干,0.01mol/LpH7.2-7.4的PBS浸泡5min,10%正常ill羊血清---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除------本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---收稿日期：2011-II-23；修订日期：2012-02-22墓金项目：国家朿点基础研究发展计划項目(No・2011CB100804)・/作者简介：刘畅(1985-),女(汉族)，硕士-E-mail:neHU_liuchang@I63.com*通讯作者:李庆章，教授，博士研究生导师.E-mail:qzli@neau.edu.cn---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---光信号，导管和腺泡腔内侧乳腺上皮细胞则无信号,导管和腺泡周围的成纤维细胞有较弱信号或无信号。2.2奶牛乳腺组纽整...