西瓜种子细菌性果腐病消毒方法研究摘要：研宄了物理方法(干热处理)、化学药剂(甲醛、盐酸、过氧化氢、次氯酸钠)以及杀菌剂对西瓜(Citrulluslanatus)种子细菌性果腐病消毒效果的影响。结果表明，3%的HC1和5%的甲醛处理20min及0.5%或1%ZC处理1h，对西瓜种子细菌性果腐病防治效果良好，对西瓜种子发芽率及发芽势无显著影响，且对种子胚根生长具有明显的促进作用，建议在生产上推广使用。关键词：西瓜(Citrulluslanatus);细菌性果腐病；消毒方法中图分类号：S436.5;S651文献标识码：A文章编号:0439-8114(2016)11-2808-03DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.11.024瓜类细菌性果腐病(BacterialFruitBlotch，BFB)主要初侵染源为带菌种子，通过伤口、皮孔侵染，是典型的由种子带菌引起的侵染性病害［1］。病害一旦发生，幼苗大面积死亡，果实大面积腐烂，且扩展非常迅速，导致瓜类作物毁灭性的损失。生产健康的种子，防止种子带菌和种子进行消毒是有效控制果腐病发生的主要措施［2］。目前种子消毒的方法主要有物理处理、化学药剂处理、发酵处理等。Lovic等［3］发现1%HC1处理15min可降低种子发病率;赵秋菊等［4］发现先用5%HC1或5%双氧水或过氧乙酸40倍稀释液消毒1h，再经71°0干热杀菌4d可将西瓜病株率降低到1%以下；张国裕等［5］发现用0.5%漂白粉消毒5min即可杀死种子表皮所携带的果腐病病菌，而干热处理对该病菌的杀菌效果不明显。前人关于西瓜种子果腐病消毒的研宄已有报道，但存在标准不统一、研究结果不一致等问题。为此，试验结合前人的研宄结果，对多种果腐病的消毒方法进行了研宄，以期在同一标准下筛选出适合西瓜种子消毒的方法，为西瓜细菌性果腐病的防治提供参考。1材料与方法1.1试验材料供试西瓜品种为早佳8424,由新疆农业科学院哈密瓜研宄中心提供。细菌性果腐病病原菌(Acidovoraxavenaesubsp.citrulli)(以下简称Aac)由华中农业大学植物病理学研宄室提供。供试化学品：甲醛和过氧化氢均购自国药集团化学试剂有限公司，盐酸购自信阳市化学试剂厂，次氯酸钠购自天津市东丽新中村。杀菌剂:杀菌剂1号(ZC)购自中国农业科学院、杀菌剂2号（XJ）购自新疆农业科学院。KBA培养基配方：蛋白胨20g，硫酸镁1.5g,磷酸氢二钾1.5g，甘油10g，琼脂粉13g，去离子水定容至1000mL，pH7.0〜7.4。KB液体培养基配方:KBA配方中不加琼脂粉。1.2抗利福平Aac菌株的诱变制备含0.05、0.1、0.5、1、2、5、10、20、30、50、75、100Pg/mL利福平（Rif）的KBA平板，从低浓度到高浓度逐次诱变抗100ug/mLRif的Rif-Aac菌株，在含100ug/mLRif的KBA平板上继代培养5代后保存备用。1.3Rif-Aac带菌西瓜种子的制备将Rif-Aac菌株在KBA平板上划线培养48h（28°C），挑取单菌落，接种于含100tig/mLRif的KB培养液中，30°（3下200r/min振荡培养24h。将培养菌液在6000r/min下离心5min,弃上清液后收集菌体，用0.1mol/L的无菌PBS（pH7.2）缓冲液重新悬浮，装入250mL三角瓶中，调整菌悬液OD600nm介于0.3〜0.4（菌体浓度约108CFU/mL）之间。将西瓜种子充分浸入菌悬液中，250r/min振荡培养1h，滤去菌液，自然风干后备用。1.4种子消毒方法1.4.1物理方法干热处理在烘箱中进行。采用温度时间双因素随机区组设计，温度设70、75、80°C3个水平，时间设24、48、72h3个水平，以接种过Aac的种子(CK1)和健康种子(CK2)为对照，共11个处理，每处理3次重复，每重复100粒种子。种子干热处理后浸种，采用平皿培养法将种子置入灭菌的滤纸上，加入无菌水保湿，置于30°C培养箱催芽，120h后测定发芽率，统计发病种子数。从己催芽的种子中选取30粒播种于消毒基质中，进行穴盘育苗，观察并统计发病率。1.4.2化学方法采用药剂浓度、处理时间双因素随机区组设计，分别配制1%、3%、5%的HC1和甲醛，1%、5%、10%的过氧化氢，1%、2.5%、5%的次氯酸钠；以上各药剂处理时间设10、20、30min3个水平从各药剂消毒后的沙培苗中随机选取5株幼苗，加入5mL无菌水在无菌研磨钵中研磨成匀浆，静置5min后，吸取1mL研磨液涂布于含100ug/mLRif的KBA平板上，30°C下培养48h，观察记录菌落产生情况。对照及重复同“1.4.1”。1.4.3杀菌剂处理方法配制4%。的XJ，处理时...