九肽1纯化方法研究苏晨灿张忠旗赵金礼等---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---摘要：本研究运用高效液相色谱，通过对九肽-1粗品采用反相聚合色谱柱分离纯化、DEAE柱脱除三氟乙酸，获得了九肽-1纯品，结果表明，所得九肽-1收率为79%，纯度高于99%。关键词：九肽-1；高效液相色谱；纯化；离子交换OOI：10.16640/jki.37-1222/t.2018.02.175九胜肽1又名美立肽，为含有九个氨基酸的美白九肽，主要用于美白亮肤及祛斑。九肽1是一种仿生肽，它和黑色素细胞上的MCl受体有非常好的匹配性，因此可以作为促黑色素细胞激素的对抗剂，竞争性的与MCl受体结合，阻止酪氨酸酶进一步被激活而产生黑色素。九肽1竞争性的封闭黑素母细胞上受体与各种因子信号的入口，弱化了黑素母细胞的活性，减少黑素产生量，14天开始逐步均匀肤色，一个皮肤周期28天后，明显提亮肤色，呈现肌肤红润、白皙，因此九肽-1常被用作化妆品原料。九肽1作为化妆品原料时HPLC纯度≥99%，然而通过合成得到的九肽-1粗品中含有很多杂质，需要进一步提纯后才可以作为化妆品原料。1实验部分1.1试剂与仪器乙酸（分析纯天津市福晨化学试剂厂提供）、氢氧化钠（分析纯天津市红岩化学试剂厂）、乙酸钠（分析纯天津市天力化学试剂有限公司）、氯化钠（分析纯国药集团化学试剂有限公司）甲醇（色谱纯宿松龙华精细化工有限公司）、乙腈（色谱纯TEDIACOMPANYINC.）、三氟乙酸（色谱纯TEDIACOMPANYINC.）、微孔滤膜（0.45μm上海市新亚净化器件厂）、九胜肽1粗品（陕西慧康生物科技有限责任公司固相合成）、超纯水。制备高效液相色谱仪（创新通恒LC3000）、分析高效液相色谱仪（日立全自动L2000系列）、C18分析色谱柱（大连物理化学研究所4.6mm×250mm）、反相聚合物柱（自填体积为300mL成都科谱生物有限公司填料F型粒径为30～50}μn---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---的SBCMCIGEI反相色谱填料由提供）、纯水机（北京爱思特克科技开发有限责任公司CSR-4-10）、超声波清洗器（昆山市仪器有限公司KQ-500B）、旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂RE-52AA）、冷凍干燥机（北京博医康实验仪器有限公司FD-1C-50）、循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司SHB-Ⅲ）、双级旋片式真空泵（上海河山泵业有限公司2XZ-4）。1.2实验过程（1）样品溶解。将九胜肽-1粗品溶解于水溶液中，超声分散，用滤膜过滤，收集滤液；（2）粗品分析及程序优化。取1.2.1所得滤液0.1mL用水溶液稀释至1mL，用C18分析柱进行分析。分析及程序优化条件：流动相：A相为体积比0.1%三氟乙酸/水；B相为体积比0.1%三氟乙酸/乙腈；检测波长：215nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL；洗脱时间：30min；洗脱梯度：B相浓度从10%-90%；根据粗品分析所得结果进行程序优化：洗脱梯度从B相浓度10%-90%逐步优化至25%-55%。（3）纯化。以优化程序为参考用反相聚合物制备柱对过滤后的九胜肽-1粗肽溶液进行纯化。纯化条件：流动相：A相为体积比0.1%三氟乙酸/水B相为体积比0.1%三氟乙酸/甲醇；检测波长：215nm；流速：20.0mL/min；进样量：10mL；洗脱时间：50min；洗脱梯度：B相浓度45%-60%；收集目标物馏分并进行分析，分析条件同粗品分析，洗脱梯度：B相浓度25%55%，将纯度>99%的馏分合并，减压蒸馏浓缩，待用。（4）除三氟乙酸。将纯化后的浓缩液使用DEAE弱阴离子交换柱脱除三氟乙酸。除三氟乙酸条：流动相：A相为2%醋酸；检测波长215nm；流速：8.0mL/min；洗脱时间：50min；洗脱梯度：100%A相等度洗脱；收集目标物馏分，减压蒸馏浓缩，待用。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---（5）成骨五胜肽纯品分析及质谱确认。将1mg九肽-1纯品冻干粉溶解于1mL水溶液中。分析条件同粗品分析，洗脱梯度：B相浓度25%-55%。取1mg九肽-1纯品送第四军医大学进行质谱测定。2结果与讨论2.1粗品分析及程序优化九肽1粗品分析及程序优化图如图1所示，其中图1为根据粗品保留时间、纯度及峰型，进行三次程序优化后得到的分析图：分析程序优化到洗脱梯度B相浓度25%-55%时，粗品中所含杂质峰...