早期非小细胞肺癌肺门淋巴结微小转移灶的研究张世兴李海涛牟艳平（山东省潍坊市第二人民医院261041）【摘要】目的研究临床诊断为早期非小细胞肺癌患者的肺门淋巴结（LN）内癌细胞微小转移发生发展规律及其临床意义。方法共收集33例临床分期为I期和未经过任何术前治疗的非小细胞肺癌患者的182枚淋巴结，每枚LN切取4个不同层面Sum厚切片，用抗上皮细胞抗原的Ber-Ep4特异性抗体进行免疫组化染色，同时行常规病理染色进行对照。在常规病理石蜡切片为阴性的LN中显微镜下发现一个或多个Ber-Ep4染色阳性的细胞则判定为微小转移阳性淋巴结。统计比较方法为卡方检验（x2）,结果发现9例患者（27.3%）的21枚（11.5%）发现肺门淋巴结微小癌细胞转移灶。其中5例（15.2%）常规病理石蜡切片阴性的肺门淋巴结Ber-Ep4免疫组化染色发现有微小转移灶，另有4例患者（12.1%）常规病理多层面切片染色和Ber-Ep4免疫组化染色均发现有微小转移灶。7例lb期（N0）和2例la期（N0）患者上升为Ila或期lib（N1）。33例临床诊断为早期肺癌患者cTNM、pTNM分期lib期阳性率大于Ila期分别为15.2%、12.1%。结论病期愈晚，肺门LN微小转移愈多见，早期非小细胞肺癌Ber-Ep4免疫组化染色可发现肺门LN微小转移，且较常规病理多层切片更易于发现LN中微小转移灶。【关键词】肺癌肺门淋巴结微小转移免疫组化染色【中图分类号】R73-37【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）02-0108-02肺癌是我国主要癌症之一，其发病率和死亡率居我国癌症第三位［1］。目前，早期肺癌的主要治疗仍为手术治疗，因此，患者术后的病理分期是否准确尤为重要，它是判断病人预后是否给予术后辅助化疗的重要依据。同样均为T1非小细胞肺癌病人，NO,N1,N2三种病人的5年生存率分别为67%,55%,23%［2］。很显然，淋巴结转移对早期肺癌手术治疗后的长期生存影响显著，而术后病理分期中的纵隔淋巴结分期的准确性对于临床诊断为早期肺癌患者(CT1-2N0-1M0)的最终期别判定影响更大，因为Nl、N2患者的生存率显著下降［2,3］，而且应给予术后辅助化疗。然而常规病理分期淋巴结的检查只是每个淋巴结一个平面的石蜡切片HE染色检查，对于淋巴结中的微小转移和不在此平面的转移灶恐很难发现。国外少数学者利用一些不与间质细胞发生反应的抗上皮细胞膜抗原的抗体如Cytokeratin系列和Ber-Ep4对肺癌和食管癌中那些石蜡切片检查为阴性的淋巴结惊醒免疫组化染色检查，结果发现奋17%的淋巴结中已有微小癌细胞转移灶。而且这些患者的5年生存率与免疫组化检查仍未发现微小转移的患者相比显著下降［4,5］。因此，一部分常规病理报告为NO的病人实际上属于N1.因此，此项研宄研宄的0的的旨在了解我国临床诊断为早肺癌患者的LN内微小转移发生发展规律及其预后的关系。1材料与方法1.1病人入组条件及来源：2008年1月至2012年1月之间连续收入我科行手术治疗，术前临床分期为I期(CT1〜2N0M0)和未经过任何术前治疗的临床诊断为早期的肺癌患者。共入组33例，包括男性21例，女性12例。年龄范围15-78岁，平均年龄为59.8岁。根治性肺叶切除30例，双肺叶切除3例，包括清扫各肺门区域淋巴结。病理类型包括：鳞癌11例，腺癌14例，腺鱗癌3例，肺泡细胞癌4例，肺母细胞瘤1例。1.2标本获取和保存：入组病人术中按1997年最新国际肺癌分期标准中的肺门LN分区，清扫相应区域LN。清楚地将每个LN即可切成对等两半，一半送常规病理检査，另一半免疫组化检査。1.3标本切片：每个淋巴结至少切取4个不同层面切片4张，每张切片厚8um,每个层面同吋切取两张切片，一张用于免疫组化染色，另一张用于常规病理检査进行对照。1.4免疫组化染色1.4.1试剂：免疫组化超敏试剂盒(UltrasensitiveS-P,Maixin-BiOn公司)免疫组化抗体：Ber-Ep4(Doko公司)1:50稀释。1.4.2免疫组化染色步骤：每张冰冻切片用丙酮固定10分钟，蒸流水冲洗3遍，在用pbs（PH7.4）冲洗，每次3分钟。然后每张切片加一滴或50ul过氧化酶阻断剂溶液（试剂A），室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化酶的活性。用PBS冲洗3遍，每次3分钟，除去PBS液，每张切片加一滴或50ul正常非免疫动物血清，每张切片加1滴或50ulBer-EP4稀释液（1:50），室温下孵育60分...