茶树体胚APX基因克隆及其在体胚发生过程中的表达与酶活性分析郭玉琼黄道斌李小桢朱晨张舒婷傅海峰周承哲欧阳明秋陈兰赖钟雄---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---摘要以铁观音茶树体胚为材料，克隆了茶树抗坏血酸过氧化物酶基因CsAPX（Genbank登录号为MG799534.1）。CsAPX基因包含一个长度为753bp的开放阅读框（ORF），共编码250个氨基酸，并对其进行相关生物信息学分析。APX酶活性测定结果表明在球形胚至子叶胚阶段APX酶活性呈现下降趋势，并在子叶胚阶段到达最低值，随着体胚进一步的分化，在子叶胚、成熟胚和萌发胚---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---阶段，茶树APX酶活性不断上升，总体呈“先降后升”的趋势。在体胚发生过程中CsAPX基因的表达分析显示，CsAPX基因在茶树体胚发生的5个阶段均存在显著差异表达，总体呈“升—降—升”的趋势，其中在萌发胚阶段的CsAPX基因的表达水平显著高于其他4个阶段，推测CsAPX基因在体胚发生过程中的萌发胚阶段发挥着重要的作用。关键词茶树体胚;抗坏血酸过氧化物酶;基因克隆;表达分析;酶活性分析S571.1AAbstractTheascorbateperoxidasegeneCsAPX（GenBankaccessionnumber：MG799534.1）wasclonedfromthesomaticembryoofCamelliasinensiscultivar‘Tieguanyin.TheCsAPXgenecontainedanopenreadingframe（ORF）of753bpinlength，whichwouldencodeatotalof250aminoacids，andbioinformaticsanalysisaboutCsAPXgenewasalsoemployed.ThetotalAPXactivitywasmeasuredduringthewholesomaticembryogenesisandtheresultsshowedthatthetotalAPXenzymeactivitypresentedadownwardtrendintheglobularembryotocotyledonaryembryostage，andreachedthelowestvalueinthecotyledonembryostage.Withthefurtherdifferentiationoftheembryocells，thetotalAPXenzymeactivityincreasedcontinuouslyduringthecotyledonaryembryostage，theembryomaturationstageandthegerminatingstage，andshowedanoveralltrendof“decreasingfirstandthenrising”.TheexpressionofCsAPXwassignificantlydifferentbetweenthe5stagesofthesomaticembryogenesis，showinganoveralltrendof“up-down-up”withasignificantlyhigherexpressionlevelinthegerminatingstagethanintheother4embryostages.ItwasspeculatedthatCsAPXplayedanimportantroleinthegerminatingstage.Keywordssomaticembryoofteaplant;ascorbateperoxidase;genecloning;expressionanalysis;enzymeactivityanalysisDOI10.3969/j.issn.1000-2561.2019.05.013抗壞血酸过氧化物酶（ascorbateperoxidase，APX）是植物参与活性氧代谢的重要抗氧化酶之一，在清除活性氧和降低细胞氧化损伤等方面发挥着重要作用[1]。APX催化超氧化物阴离子还原的化学反应为2AsA（抗坏血酸）+H2O2（过氧化氢）→2MDHA（单脱氢抗坏血酸）+H2O，其中APX以抗坏血酸（AsA）为电子供体，催化H2O2转变为H2O，降低植物细胞中活性氧的水平，减轻其对植物体的氧化损伤[2-3]。近年来，随着基因克隆技术的蓬勃发展，APX基因在拟南芥[4-5]、大麦[6]、甜菜[7]和橡胶树[8]等植物中已有相关研究。Davletova等[4]的研究发现，当APX基因的表达水平较低时，会导致拟南芥中叶绿体和过氧化物酶体的活性氧清除系统工作缓慢，不能及时分解光合作用和光呼吸中产生的H2O2，导致H2O2含量升高，引起植物细胞发生脂质过氧化损伤。罗丹等[5]研究发现，草酸胁迫能够有效诱导拟南芥APX基因转录水平的提高，而APX基因过表达后的拟南芥植株较野生型相比，对草酸胁迫的抵抗力大幅提高。Shi等[6]将大麦APX基因转入拟南芥后发现，在高温胁迫处理后，非转基因植株的叶片出现大量枯黄，而转基因植株的叶片仍然保持正常。Dunajska-Ordak[7]和Chao[8]也分别在甜菜和橡胶树中发现，APX基因的高效表达可以显著提高甜菜和橡胶树的抗逆性。最近，Tian等[9]研究发现盐胁迫和干旱胁迫能够诱导茶树APX基因的表达量显著上升。因此，APX基因在植物抗逆胁迫中发挥重要作用。---本文来源于网络，仅供参考...