松茸对小鼠免疫功能影响的实验研究王涛1张玲2中元英1、2（通讯作者）李丽娟2（1大理学院基础医学院云南大理671000；2大理学院公共卫生学院云南大理671000）【摘要】目的探讨松茸醇提取物的水溶液及脂溶液对小鼠免疫功能的影响。方法分别用松茸的水溶液及脂溶液给小鼠灌胃10d后，检测小鼠免疫器官重量、单核-腹腔巨噬细胞吞噬能力、淋巴细胞增殖转化及细胞因子的情况。结果胸腺指数测定和淋巴细胞转化试验阳性。结论松茸对正常小鼠有免疫增强作用。【关键词】松茸免疫活性小鼠【中图分类号】R392【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）01-0237-02松茸因含有肽、出类以及多种酶类，被日木人成为“菇中之王”［1］。研究表明野生松茸可能增强机体免疫功能［2］。木研究拟通过采集云南野生松茸的水提剂和醇提剂为受试药物进行小鼠的免疫活性测定，检测其免疫功能及其可能的机制，现报道如下：一、材料和方法（一）材料1.受试药品由大理学院药学院药物研究所提供的松茸乙醇提取物，提取率为25%〜32%之间，使用冷冻法干燥。2.实验动物由昆明医学院动物中心提供的昆明种小鼠，共计515只，其中雄性259只，雌性256只，4〜6周龄,体重18〜22g。实验动物许可证号:scxk（滇）2005-0008。3.主要仪器和试剂（1）主要仪器连续波长酶标仪（PowerwaveXS,美国），C02培养箱（SANYO,日本），恒温水浴箱（DKB-600B型，上海一恒科学仪器有限公司），电子天平（天J42003，上海上平仪器公司），台式离心机（Mini-6K,杭州奥盛仪器有限公司），低速离心机（LC-4012,科大创新股份有限公司中佳分公司）。（2）主要试剂二甲基亚砜DMS0（天津市风船化学试剂科技有限公司，批号:070707）,注射用环磷酰胺（山西普德药业有限公司，批号：20100307），乙醚（山西杨林工业开发区汕滇药业有限公司，批号：101030）,小牛血清（北京奥博星生物技术责任有限公司，批号:20100303），RPM1-1640（1nvitrogen公司，批号：1313945），植物血凝素PHA（SolarbioLifesciences,批号：P8090）,四唾哇盐（MTT,又称四甲基偶氮唑盐｝。MouselL-2ELISA检测试剂盒（Quantikine,批号：281038），MouseTNFαEUSA检测试剂盒（Quantikine,批号：282254）。（二）方法1.实验分组松茸（SR）样品溶解吋使用超纯水（ddH20）和二甲基亚砜（DMSO）两种溶剂。140只小鼠分为14个小组，每组10只。分组情况为：SR水溶组（200mg/kg）,SR脂溶组（200mg/kg），SR+CTX水溶组（200mg/kg+40mg/kg），SR+CTX脂溶组（200mg/kg+40mg/kg）,每个大组根据性别分为雌雄两个小组，另设溶剂对照组DMSO（20ml/kg）和ddH20（20ml/kg）各有雌雄两个小组,环磷酰胺阳性对照组（CTX,40mg/kg）,雌雄两个小组。各组分别灌胃1次/d,连续10d后检査松茸提取物对小鼠免疫器官、巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞增殖情况、细胞因子（IL-2,TNFα）的影响。2.检测方法2.1脏器/体重比值测定：小鼠颈椎脱臼处死称重后，立即取出胸腺和脾脏，用滤纸吸干血液后称重，胸腺（脾）指数单位：胸腺（脾）质量/小鼠体质量（mg/10g）。2.2吞噬功能：处死动物前3d，以5%的淀粉肉汤启动小鼠巨噬细胞，采用半体内法检测腹腔巨噬细胞吞噬功能，以100个巨噬细胞中吞噬酵母菌的巨噬细胞数（吞噬率）及每个巨噬细胞吞噬酵母菌的个数（吞噬指数）作为评价指标。2.3T淋巴细胞增殖测定（MTT法）：无菌取出脾脏，制成脾细胞悬液，用RPM11640不完全营养液洗漆3次，1000r/min离心10min,然后用完全营养液配成l×107/mI。取100μl加入96孔细胞培养板内（每孔l×106个细胞，每个样品做3个复孔）。再加入240mg/L的PHA20μl（使终浓度为40mg/L,同时设不加PHA的对照孔），置37°C、5%CO2培养箱中培养48h后，每孔加入10μIMTT溶液（5g/L）,再继续培养4h,离心，弃上清液，然后加入30%DMS0100μl,充分振荡后静置20min,用酶标仪于波长570nm处测A值。2.4细胞因子的检测将动物用乙醚麻醉以后，摘眼球取血。将血液静置离心后，获得血清，测IL-2,TNF&alPha;得指标，具体按试剂盒说明操作步骤进行。3.统计学分析应用SPSS17.0软件对数据进行方差分析。显著性检验水准为α=0.05。二、结果及讨论...