DNS法测定金针菇粗多糖含量的研究秦瑞鑫孙玉帅朱奕彤穆秀燕张玉苗摘要：为测定金针菇中总的粗多糖含量，采用热水提取法提取了金针菇多糖，通过二硝基水杨酸显色法，以葡萄糖为对照，测定了还原糖和总糖的含量，二者差值即为总的粗多糖含量。结果表明：金针菇中粗多糖含量为0.05mg/mL;DNS法的重复性、稳定性、加样回收均较好，提高了试验的准确度和效率。DNS法操作简单，所受干扰较少，适合于快速测定金针菇样品中总的粗多糖含量。：R284.2文献标识码：A：1674-9944（2019）18-0173-031引言金针菇（Flammulinavelutiper）又名冬菇，隶属白菇科、金线菌属，是一种食药两用菌，广泛分布于世界各地。金针菇味道鲜美，富含蛋白质和多种活性营养物质。其中，精氨酸和赖氨酸含量较高，有利于促进儿童智力发育，因此金针菇也被称为“益智菇。金针菇多糖作为其主要活性营养物质之一，具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、抗衰老等多种功效，被广泛应用于医药和食品加工等领域。目前，广大研究者对于金针菇多糖的研究主要集中在分离纯化、结构探析、相关产品开发等方面。金针菇粗多糖的提取及快速测定是开展相关研究工作的基础。目前，常用的金针菇多糖提取方法有单一酶法、超声波法、微波法。但上述方法对设备要求较高，酶易失活等缺点很难应用到实际食用菌多糖工业生产中。热水提取法操作简单、成本较低、灵活性强，为解决上述问题提供了途径。目前，常用于多糖测定的传统方法有苯酚一硫酸法和蒽铜一硫酸法，但上述方法无法排除还原糖对测得结果的影响，且浓硫酸具有强腐蚀性，应用极为不便。DNS法利用在偏碱性条件下，还原糖和总糖分别与3，5一二硝基水杨酸发生显色反应，从而可以准确、快速测定出还原糖与总糖的含量，二者差值即为多糖含量。DNS法目前已广泛应用于多糖含量的测定。但DNS法快速测定金针菇多糖的报道较少，为此，本试验采用热水提取法和DNS法来测定金针菇中多糖含量，为金针菇多糖的相进一步开发利用提供参考。2材料与方法2.1材料与试剂金针菇子实体、蒸馏水、无水乙醇、氯仿、酒石酸钾钠、苯酚、3，5～二硝基水杨酸、盐酸、氢氧化钠，试剂均为分析纯。2.2仪器与设备电子天平、电热恒温干燥箱、离心机、植物组织研磨机、紫外分光光度计、恒温水浴箱。2.3方法2.3.1标准曲线的绘制将葡萄糖放置于干燥箱中，105℃干燥至恒重，用天平准确称取100mg置于烧杯中，加入少量蒸馏水溶解，定容至100mL，充分混匀，即可得浓度为1mg/mL的标准葡萄糖溶液。用移液枪准确吸取0.2mL、0.4mL、O·6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL的标准葡萄糖溶液分别放置于25mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度线，充分摇匀。分别移取1mL于6支洁净试管中，加入去离子水1mL，DNS试剂2mL。摇匀后置于沸水浴加热5min。取出后迅速冷却至室温，另取一洁净试管，加入蒸馏水，做空白对照。将以上溶液移人比色皿，设定紫外分光光度计的波长为490nm，测得吸光值。以葡萄糖质量X为横轴，吸光度y为纵轴绘制标准曲线。2.3.2金针菇粗多糖的提取对所购置的金针菇进行洗净、晾干，在55℃条件下对金针菇进行干燥至恒重，放入研钵中粉碎后放入组织研磨机进行研磨，过40目筛子，对已筛取的粉末装袋。准确称取20.00g粉末置于550mL圆底烧瓶中，加入200mL蒸馏水，二者混合均匀后，煮沸1h，此过程中用玻璃棒搅拌3～4次，后经40目筛子。将留在筛子上的糊状物重新放入蒸馏烧瓶中，加入100mI。水。重复上述步骤3次。合并蒸煮液并蒸馏浓缩至原来的1/3体积。将上述得到的浓缩液上机离心，4000r/min，离心两次，每次时间为5min，弃沉淀。向所得溶液中加入15mL80%的乙醇，相同条件离心两次，65℃条件下将沉淀烘干，得粗多糖，后研磨至粉末，保存备用。2.3.3金针菇粗多糖含量的测定（1）金针菇粗多糖溶液的制备：精确稱取200mg粗多糖粉末，用少量蒸馏水溶解后置于100mL容量瓶中，加水至刻度线，摇匀，即得。（2）还原糖溶液的制备：准确量取上述溶液5mI，置于10mL容量瓶中，加酚酞指示液一滴，再加入15%氢氧化钠溶液直至溶液至微红色，加纯水定容至刻度，充分摇匀，即得此溶液。（3）总糖溶液的制备：准确量取供试溶液1mL置于洁净试管中，加入蒸馏水1mL和7mol/L盐酸...