组织蛋白质组学在动脉粥样硬化疾病中的研究进展［摘要］动脉粥样硬化是一种高致残率和致死率的疾病之一。其分子机制的初步探明已经为疾病的预防、诊断和康复检测提供一些重要的信息，但更深层次的机制未明。该研究概述了近年来蛋白质组学技术的发展,动物模型中动脉粥样硬化组织蛋口质组学以及人类的动脉粥样硬化组织蛋白质组学的研究进展，并就动脉粥样硬化组织蛋白组学存在的问题以及发展方向作了探讨。［关键词］动脉粥样硬化；机制；组织；蛋白质组学［中图分类号］R543［文献标识码］A［文章编号］1674-0742(2014)06(c)-0195-02动脉粥样硬化是血管壁广泛病变的疾病，从血管壁的轻度增厚、血管管腔的狭窄、冠状动脉闭塞到最终的心肌梗死。在发展中以及发达国家，该疾病是一种其分子机制的初步探明已经为临床的预防、诊断和康复检测提供一些重要的信息，但更深层次的机制未明。由于蛋白质在疾病的发生发展中发挥重要作用，蛋白质组学为进一步的探讨疾病机制提供了一种较理想的方法学。当前，动脉粥样硬化的蛋白质学研究主要集屮在血清生物学标记的研究，然而组织蛋白质组学却可以深层次研究细胞因子的分泌、动脉壁或细胞。该综述报道了动脉粥样硬化的组织蛋白质组学最新研究进展。1蛋白质组学技术的发展目前，蛋白质组学的分析技术已经历了两代，利用2DE为第一代蛋白分离技术应用于蛋白质组学；在质谱中的ESI发展和最新进展提供了第二代蛋白质组学的方法学，该技术主要以高相液相色谱为基础，称为Shotgun蛋白质组学或MudPTTo虽然经典的蛋白质组学方法部分被Shotgun蛋白质组学取代，但粥样斑块蛋白质组学的研究原则上还是主要依靠2DE分析。另外，其他的方法还有LC-MS/MS.抗体或印迹分析以及MS成像，最近组织微阵列(TMAs)是研究血管疾病蛋白表达的强有力的工具。2组织蛋白质组学在动脉粥样硬化的研究2.1动脉粥样硕化动物模型的蛋白质组学研究apoE缺陷小鼠是研究动脉粥样硬化病理学最理想的动物模型。最近有两项研究以apoE缺陷小鼠为模型，利用2DE分析主动脉的差异表达。第1项研究为不同主动脉损伤(轻度、中度、重度)的小鼠与野生型小鼠比较,分析蛋白差异表达。在银染胶屮鉴定出79个差异表达点，这些是缺陷小鼠动脉粥样硕化早期出现的免疫活性、氧化应激和能量损伤的蛋白质。特别是，抗氧化酶蛋白l-Cys只在野生型小鼠主动脉组织中发现，而氧化形式在apoE缺陷小鼠中高表达。研究还显示，谷胱甘肽还原酶和苹果酸酶的增加与粥样斑块氧化应激和抗氧化反应一致。更为有趣的是，在apoE缺陷小鼠粥样斑块屮出现免疫球蛋白的沉积［1］。第2项研究针对apoE缺陷TLR2部分缺陷或完全敲除的小鼠的主动脉进行经典的蛋白质组学研究。报道显示，TLR2+/+小鼠的斑块内单核细胞侵润、凋亡、脂质含量和前炎症因子增加，平滑肌细胞减少。进一步确认，免疫系统与引起动脉粥样硬化进展的炎症反应的联系，另外还说明了TLR2在此过程中作用。SyproRuby胶的差异分析，7种代表氧化应激适应性反应的蛋白（顺乌头酸酶、延胡索酸水合酶、凝溶胶蛋白、血红蛋白、肌球蛋白轻链多肽3、S0D2和Vesl-2）在TLR2+/+小鼠的斑块高表达［2］。Almofti等利用高胆固醇饮食和维生素D3注射诱导大鼠动脉粥样硕化模型，研究主动脉差异蛋白表达,通过ColloidalCoomasie2DE胶和质谱分析，鉴定出46个蛋白。18种在疾病组织中过表达，包括一系列氧化过程中的酶如抗氧化酶2、NADII脱氢酶、Fe-S；28种下调蛋白，包括CaM-kIIL转移酶、果糖双磷酸醛缩酶。任何一个验证试验都认为这些蛋白参与动脉粥样硬化过程［3］。外科学方法诱导的颈动脉狭窄大鼠模型，进行转录组和蛋白质组学研究，利用2DE和银染鉴定出16个表达差异点,其中5个为2到3个蛋白的复合体。最终鉴定19种蛋口，其中8种蛋口表达水平与转录水平一致。这些研究证实，转录组学可以不必考虑翻译和翻译后蛋白水平的调控［4］。2.2人类动脉粥样硬化标本的研究目前，人类粥样斑块蛋白质组学的研究比动物模型更广泛。不同的蛋白质组学技术相继被应用，从Shotgun蛋白质组学或2DE到抗体阵列和质谱成像。用于研究的斑块标本大部分來自颈动脉组织活检。3种经典的颈动脉组织提取物的蛋白质组学从2005...